| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-13页 |
| 1.1 β-葡萄糖苷酶的概述 | 第8-9页 |
| 1.1.1 β-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第8页 |
| 1.1.2 β-葡萄糖苷酶的来源 | 第8页 |
| 1.1.3 β-葡萄糖苷酶的应用 | 第8-9页 |
| 1.1.4 β-葡萄糖苷酶的研究进展 | 第9页 |
| 1.2 低聚龙胆糖的概述 | 第9-10页 |
| 1.2.1 低聚龙胆糖的性质及应用 | 第9页 |
| 1.2.2 低聚龙胆糖的制备 | 第9-10页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统 | 第10-12页 |
| 1.3.1 毕赤酵母表达系统简介 | 第10-11页 |
| 1.3.2 毕赤酵母共表达伴侣蛋白策略 | 第11页 |
| 1.3.3 毕赤酵母发酵工艺的优化 | 第11-12页 |
| 1.4 立题依据和研究意义 | 第12页 |
| 1.5 论文主要研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-23页 |
| 2.1 实验材料 | 第13-15页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第13页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第13页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第13-14页 |
| 2.1.4 培养基 | 第14-15页 |
| 2.2 实验方法 | 第15-18页 |
| 2.2.1 重组菌 pastoris KM71/pPIC9K-bgl1的构建 | 第15-18页 |
| 2.2.2 重组菌 pastoris KM71/pPIC9K-bgl1/pPICZ A-pdi的构建 | 第18页 |
| 2.2.3 重组Pichia pastoris的发酵 | 第18页 |
| 2.3 分析方法 | 第18-20页 |
| 2.3.1 酵母细胞浓度的测定 | 第18-19页 |
| 2.3.2 β-葡萄糖苷酶水解活力的测定 | 第19页 |
| 2.3.3 蛋白浓度的测定 | 第19页 |
| 2.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第19页 |
| 2.3.5 重组β-葡萄糖苷酶的纯化 | 第19-20页 |
| 2.3.6 重组β-葡萄糖苷酶的酶学性质研究 | 第20页 |
| 2.4 低聚龙胆糖的酶转化工艺 | 第20-23页 |
| 2.4.1 利用重组β-葡萄糖苷酶的逆水解活性合成低聚龙胆糖工艺的优化 | 第20-21页 |
| 2.4.2 利用重组β-葡萄糖苷酶的转苷活性合成低聚龙胆糖工艺的优化 | 第21-22页 |
| 2.4.3 酶转化产物的测定方法 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-40页 |
| 3.1 Trichoderma viride β-葡萄糖苷酶克隆表达及酶学性质研究 | 第23-29页 |
| 3.1.1 Trichoderma viride β-葡萄糖苷酶在Pichia pastoris中的异源表达 | 第23-24页 |
| 3.1.2 重组P.pastoris KM71/pPIC9K-bgl1/pPICZ A-pdi的构建及表达 | 第24-26页 |
| 3.1.3 重组β-葡萄糖苷酶的分离纯化 | 第26-27页 |
| 3.1.4 重组β-葡萄糖苷酶的酶学性质研究 | 第27-29页 |
| 3.2 重组P.pastoris KM71 /pPIC9K-bgl1/pPICZ A-pdi3.6 L罐发酵优化 | 第29-33页 |
| 3.2.1 诱导温度对P. pastoris KM71/pPIC9K-bgl1/pPICZ-A-pdi 3.6 L罐发酵的影响 | 第29-30页 |
| 3.2.2 初始诱导菌体浓度对P.pastoris KM71/pPIC9K-bgl1/pPICZ-A-pdi 3.6 L罐发酵的影响 | 第30-31页 |
| 3.2.3 甲醇浓度对P.pastoris KM71/pPIC9K-bgl1/pPICZ-A-pdi3.6 L罐发酵的影响 | 第31-33页 |
| 3.3 低聚龙胆糖的酶转化工艺 | 第33-40页 |
| 3.3.1 利用重组β-葡萄糖苷酶的逆水解活性合成低聚龙胆糖工艺的优化 | 第33-36页 |
| 3.3.2 利用β-葡萄糖苷酶的转苷活性合成低聚龙胆糖工艺的优化 | 第36-40页 |
| 主要结论与展望 | 第40-42页 |
| 主要结论 | 第40-41页 |
| 展望 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第47页 |
