| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 人参皂苷 | 第13-16页 |
| 1.1.1 人参皂苷的分类 | 第13-15页 |
| 1.1.2 人参皂苷Rh4 | 第15-16页 |
| 1.1.3 人参皂苷的抗肿瘤作用 | 第16页 |
| 1.2 结肠癌的研究及治疗进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 结肠癌概况 | 第16-17页 |
| 1.2.2 结肠癌的治疗进展 | 第17-18页 |
| 1.3 抗肿瘤机制研究 | 第18-19页 |
| 1.3.1 细胞程序性死亡 | 第18-19页 |
| 1.3.2 氧化应激(ROS)信号转导通路 | 第19页 |
| 1.3.3 MAPK-p53信号转导通路 | 第19页 |
| 1.4 本课题研究目的、意义及内容 | 第19-23页 |
| 1.4.1 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第20-23页 |
| 第二章 人参皂苷Rh4体外抗结肠癌作用研究 | 第23-29页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.1 实验试剂及药品 | 第23页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验所选用的细胞株 | 第24页 |
| 2.1.4 相关实验试剂的配制 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-25页 |
| 2.2.1 CCK-8细胞毒性实验 | 第24-25页 |
| 2.2.2 细胞克隆形成实验 | 第25页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第25-27页 |
| 2.3.1 人参皂苷Rh4对Caco-2、HCT-116和CCD-18Co细胞的抑制作用 | 第25-26页 |
| 2.3.2 人参皂苷Rh4对Caco-2、HCT-116和CCD-18Co细胞的克隆形成能力的影响 | 第26-27页 |
| 2.4 本章小结 | 第27-29页 |
| 第三章 人参皂苷Rh4体内抗结肠癌作用研究 | 第29-37页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第29-30页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第29页 |
| 3.1.2 主要仪器及设备 | 第29-30页 |
| 3.1.3 实验细胞株 | 第30页 |
| 3.1.4 实验动物 | 第30页 |
| 3.1.5 相关实验试剂及药物的配制 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 3.2.1 结肠癌Caco-2细胞的前期准备 | 第30页 |
| 3.2.2 结肠癌Caco-2细胞肿瘤模型的建立 | 第30页 |
| 3.2.3 荷瘤裸鼠分组及腹腔注射给药 | 第30-31页 |
| 3.2.4 相关指标观察及检测 | 第31页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第31-36页 |
| 3.3.1 结肠癌Caco-2荷瘤小鼠的一般情况的观察 | 第32页 |
| 3.3.2 人参皂苷Rh4对Caco-2荷瘤小鼠的体重的影响 | 第32-33页 |
| 3.3.3 人参皂苷Rh4对Caco-2荷瘤小鼠的肿瘤体积的影响 | 第33-34页 |
| 3.3.4 人参皂苷Rh4对Caco-2荷瘤小鼠的瘤重的影响 | 第34-35页 |
| 3.3.5 人参皂苷Rh4对Caco-2荷瘤小鼠的肿瘤组织学的影响 | 第35页 |
| 3.3.6 人参皂苷Rh4对Caco-2荷瘤小鼠的肝脏、肾脏、心脏和肺组织学的影响 | 第35-36页 |
| 3.4 本章小结 | 第36-37页 |
| 第四章 人参皂苷Rh4对结肠癌细胞的周期分布影响 | 第37-43页 |
| 4.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 4.1.1 实验试剂及药品 | 第37页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第37页 |
| 4.1.3 实验所选用的细胞株 | 第37页 |
| 4.1.4 相关实验试剂的配制 | 第37-38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第38页 |
| 4.2.2 流式细胞仪检测细胞周期分布 | 第38页 |
| 4.2.3 蛋白印迹法检测细胞中与周期相关的蛋白表达 | 第38-39页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第39-41页 |
| 4.3.1 人参皂苷Rh4阻断Caco-2和HCT-116细胞周期于G0/G1期 | 第39-40页 |
| 4.3.2 人参皂苷Rh4对Caco-2和HCT-116细胞的G0/G1期相关蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
| 4.4 本章小结 | 第41-43页 |
| 第五章 人参皂苷Rh4对结肠癌细胞的凋亡影响 | 第43-53页 |
| 5.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 5.1.1 实验试剂及药品 | 第43页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第43页 |
| 5.1.3 实验所选用的细胞株 | 第43-44页 |
| 5.1.4 相关实验试剂的配制 | 第44页 |
| 5.2 实验方法 | 第44-45页 |
| 5.2.1 细胞培养 | 第44页 |
| 5.2.2 Hoechst33342荧光染色分析细胞形态学变化 | 第44页 |
| 5.2.3 透射电镜TEM分析细胞形态学变化 | 第44页 |
| 5.2.4 AV/PI染色分析细胞凋亡 | 第44页 |
| 5.2.5 JC-10测定细胞线粒体膜电位 | 第44-45页 |
| 5.2.6 蛋白印迹法检测细胞中与凋亡相关的蛋白表达 | 第45页 |
| 5.2.7 蛋白印迹法检测肿瘤组织中人参皂苷Rh4对Caspase3蛋白酶表达的影响 | 第45页 |
| 5.2.8 免疫组化测定肿瘤组织中Caspase3的表达 | 第45页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第45-52页 |
| 5.3.1 人参皂苷Rh4对Caco-2和HCT-116细胞Hoechst33342染色的影响 | 第45-46页 |
| 5.3.2 人参皂苷Rh4对Caco-2和HCT-116细胞凋亡形态的影响 | 第46-47页 |
| 5.3.3 人参皂苷Rh4对Caco-2和HCT-116细胞AnnexinV/PI染色的影响 | 第47-48页 |
| 5.3.4 人参皂苷Rh4对Caco-2和HCT-116细胞线粒体膜电位的影响 | 第48-49页 |
| 5.3.5 人参皂苷Rh4对Caco-2和HCT-116细胞的凋亡相关蛋白表达的影响 | 第49-51页 |
| 5.3.6 人参皂苷Rh4对肿瘤组织的Caspase3蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| 5.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第六章 人参皂苷Rh4对结肠癌细胞的自噬影响 | 第53-61页 |
| 6.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 6.1.1 实验试剂及药品 | 第53页 |
| 6.1.2 实验仪器 | 第53页 |
| 6.1.3 实验所选用的细胞株 | 第53页 |
| 6.1.4 相关实验试剂的配制 | 第53-54页 |
| 6.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 6.2.1 细胞培养 | 第54页 |
| 6.2.2 透射电镜TEM分析细胞形态学变化 | 第54页 |
| 6.2.3 Lyso Tracker red 染色分析细胞形态学变化 | 第54页 |
| 6.2.4 蛋白印迹法检测细胞中与自噬相关的蛋白表达 | 第54页 |
| 6.2.5 CCK-8和AnnexinV/PI双染的方法检测自噬对细胞增殖的影响 | 第54页 |
| 6.2.6 蛋白印迹法检测肿瘤组织中人参皂苷Rh4对LC3蛋白酶表达的影响 | 第54页 |
| 6.2.7 免疫组化测定肿瘤组织中LC3的表达 | 第54-55页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第55-60页 |
| 6.3.1 人参皂苷Rh4对Caco-2和HCT-116细胞形态的影响 | 第55页 |
| 6.3.2 人参皂苷Rh4对Caco-2和HCT-116细胞LysoTrackerred染色的影响 | 第55-56页 |
| 6.3.3 人参皂苷Rh4对Caco-2和HCT-116细胞的自噬相关蛋白表达的影响 | 第56-57页 |
| 6.3.4 人参皂苷Rh4诱导的自噬对细胞增殖的影响 | 第57-59页 |
| 6.3.5 人参皂苷Rh4对肿瘤组织的LC3蛋白表达的影响 | 第59-60页 |
| 6.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 第七章 人参皂苷Rh4对结肠癌细胞的ROS,MAPK和p53信号通路的影响 | 第61-69页 |
| 7.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 7.1.1 实验试剂及药品 | 第61页 |
| 7.1.2 实验仪器 | 第61-62页 |
| 7.1.3 实验所选用的细胞株 | 第62页 |
| 7.1.4 相关实验试剂的配制 | 第62页 |
| 7.2 实验方法 | 第62-63页 |
| 7.2.1 细胞培养 | 第62页 |
| 7.2.2 DCFH-DA染色分析细胞内ROS变化 | 第62页 |
| 7.2.3 MitoSOXRED染色分析细胞内ROS变化 | 第62页 |
| 7.2.4 蛋白印迹法检测细胞中MAPK-p53信号通路蛋白的表达 | 第62页 |
| 7.2.5 蛋白印迹法检测肿瘤组织中人参皂苷Rh4对p-JNK和p-p53蛋白表达的影响 | 第62页 |
| 7.2.6 免疫组化测定肿瘤组织中p-JNK和p-p53蛋白表达 | 第62-63页 |
| 7.2.7 AnnexinV/PI双染的方法检测ROS,JNK和p53对细胞凋亡的影响 | 第63页 |
| 7.2.8 蛋白印迹法检测ROS,JNK和p53对细胞凋亡、自噬信号转导的影响 | 第63页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第63-68页 |
| 7.3.1 人参皂苷Rh4对Caco-2细胞胞内ROS水平的影响 | 第63-64页 |
| 7.3.2 人参皂苷Rh4对Caco-2和HCT-116细胞MAPK-p53信号通路的影响 | 第64-65页 |
| 7.3.3 人参皂苷Rh4对肿瘤组织中的p-JNK和p-p53蛋白表达的影响 | 第65-66页 |
| 7.3.4 ROS,JNK和p53信号分子对细胞凋亡自噬的影响 | 第66-68页 |
| 7.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 总结与展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
