| 摘要 | 第2-4页 |
| Summary | 第4-5页 |
| 外文缩略语表 | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-18页 |
| 1 传染性支气管炎 | 第11-15页 |
| 1.1 传染性支气管炎概述 | 第11页 |
| 1.2 传染性支气管炎病毒分子生物学 | 第11-13页 |
| 1.3 传染性支气管炎流行病学 | 第13-15页 |
| 2 鸭病毒性肠炎 | 第15-16页 |
| 2.1 鸭病毒性肠炎概述 | 第15页 |
| 2.2 鸭肠炎病毒分子生物学 | 第15-16页 |
| 2.3 鸭肠炎病毒疫苗载体研究进展 | 第16页 |
| 3 传染性支气管炎新型基因工程疫苗 | 第16-18页 |
| 第二章 表达IBV N基因重组DEV的构建 | 第18-34页 |
| 1 材料与方法 | 第18-26页 |
| 1.1 材料 | 第18-19页 |
| 1.1.1 病毒与细胞 | 第18页 |
| 1.1.2 质粒与菌种 | 第18页 |
| 1.1.3 酶类及主要生化试剂 | 第18-19页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第19页 |
| 1.1.5 引物 | 第19页 |
| 1.2 方法 | 第19-26页 |
| 1.2.1 转移载体的构建 | 第19-22页 |
| 1.2.1.1 IBV N基因的扩增与克隆 | 第19-21页 |
| 1.2.1.2 p U10-TPA-N转移载体的构建 | 第21-22页 |
| 1.2.2 转移载体质粒的大量制备 | 第22-23页 |
| 1.2.3 鸡胚成纤维细胞的制备 | 第23页 |
| 1.2.4 病毒基因组的提取 | 第23页 |
| 1.2.5 重组病毒的构建 | 第23-24页 |
| 1.2.6 重组病毒的筛选 | 第24页 |
| 1.2.7 重组病毒的鉴定 | 第24-25页 |
| 1.2.8 重组病毒的生物学特性 | 第25-26页 |
| 1.2.8.1 重组病毒的滴度 | 第25-26页 |
| 1.2.8.2 重组病毒的复制动力学 | 第26页 |
| 1.2.8.3 重组病毒遗传稳定性 | 第26页 |
| 2 结果 | 第26-33页 |
| 2.1 重组质粒p T-N的鉴定 | 第26页 |
| 2.2 p U10-TPA-N转移载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.3 重组病毒蚀斑筛选 | 第27-28页 |
| 2.4 重组病毒r DEV US10-N PCR鉴定 | 第28页 |
| 2.5 重组病毒r DEV US10-N间接免疫荧光鉴定 | 第28-29页 |
| 2.6 重组病毒r DEV US10-N Western blot鉴定 | 第29-30页 |
| 2.7 重组病毒r DEV US10-N生长曲线测定 | 第30-31页 |
| 2.8 重组病毒r DEV US10-N遗传稳定性鉴定 | 第31-33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 表达IBV S基因重组DEV的构建 | 第34-46页 |
| 1 材料与方法 | 第34-39页 |
| 1.1 材料与方法 | 第34-35页 |
| 1.1.1 病毒与细胞 | 第34页 |
| 1.1.2 质粒与菌种 | 第34页 |
| 1.1.3 酶类及主要生化试剂 | 第34-35页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第35页 |
| 1.1.5 引物 | 第35页 |
| 1.2 方法 | 第35-39页 |
| 1.2.1 转移载体的构建 | 第35-37页 |
| 1.2.1.1 IBV S基因的扩增与克隆 | 第35-36页 |
| 1.2.1.2 p U10-TPA-S转移载体的构建 | 第36-37页 |
| 1.2.2 转移载体质粒的大量制备 | 第37页 |
| 1.2.3 鸡胚成纤维细胞的制备 | 第37页 |
| 1.2.4 病毒基因组的提取 | 第37页 |
| 1.2.5 重组病毒的构建 | 第37页 |
| 1.2.6 重组病毒的筛选 | 第37页 |
| 1.2.7 重组病毒的鉴定 | 第37-38页 |
| 1.2.8 重组病毒的生物学特性 | 第38-39页 |
| 1.2.8.1 重组病毒的滴度 | 第38页 |
| 1.2.8.2 重组病毒的复制动力学 | 第38页 |
| 1.2.8.3 重组病毒遗传稳定性 | 第38-39页 |
| 2 结果 | 第39-44页 |
| 2.1 重组质粒p T-S的鉴定 | 第39页 |
| 2.2 p U10-TPA-S转移载体的构建 | 第39页 |
| 2.3 重组病毒蚀斑筛选 | 第39-41页 |
| 2.4 重组病毒r DEV US10-S PCR鉴定 | 第41页 |
| 2.5 重组病毒r DEV US10-S间接免疫荧光鉴定 | 第41页 |
| 2.6 重组病毒r DEV US10-S Western blot鉴定 | 第41-42页 |
| 2.7 重组病毒r DEV US10-S生长曲线测定 | 第42-43页 |
| 2.8 重组病毒r DEV US10-S遗传稳定性鉴定 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 表达IBV S1基因重组DEV的构建 | 第46-57页 |
| 1 材料与方法 | 第46-50页 |
| 1.1 材料 | 第46-47页 |
| 1.1.1 病毒与细胞 | 第46页 |
| 1.1.2 质粒与菌种 | 第46页 |
| 1.1.3 酶类及主要生化试剂 | 第46-47页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第47页 |
| 1.1.5 引物 | 第47页 |
| 1.2 方法 | 第47-50页 |
| 1.2.1 转移载体的构建 | 第47-49页 |
| 1.2.1.1 IBV S1基因的扩增与克隆 | 第47-48页 |
| 1.2.1.2 p U10-TPA-S1转移载体的构建 | 第48-49页 |
| 1.2.2 转移载体质粒的大量制备 | 第49页 |
| 1.2.3 鸡胚成纤维细胞的制备 | 第49页 |
| 1.2.4 病毒基因组的提取 | 第49页 |
| 1.2.5 重组病毒的构建 | 第49页 |
| 1.2.6 重组病毒的筛选 | 第49页 |
| 1.2.7 重组病毒的鉴定 | 第49-50页 |
| 1.2.8 重组病毒的生物学特性 | 第50页 |
| 1.2.8.1 重组病毒的滴度 | 第50页 |
| 1.2.8.2 重组病毒的复制动力学 | 第50页 |
| 1.2.8.3 重组病毒遗传稳定性 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-56页 |
| 2.1 重组质粒p T-S1的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2 p U10-TPA-S1转移载体的构建 | 第51-52页 |
| 2.3 重组病毒r DEV US10-S1蚀斑筛选 | 第52页 |
| 2.4 重组病毒r DEV US10-S1 PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 2.5 重组病毒r DEV US10-S1间接免疫荧光鉴定 | 第53-54页 |
| 2.6 重组病毒r DEV US10-S1 Western blot鉴定 | 第54页 |
| 2.7 重组病毒r DEV US10-S1生长曲线测定 | 第54页 |
| 2.8 重组病毒r DEV US10-S1遗传稳定性鉴定 | 第54-56页 |
| 3 讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 重组疫苗免疫保护效果的研究 | 第57-64页 |
| 1 材料与方法 | 第57-59页 |
| 1.1 材料 | 第57-58页 |
| 1.1.1 病毒与细胞 | 第57页 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器 | 第57页 |
| 1.1.3 实验动物 | 第57-58页 |
| 1.2 方法 | 第58-59页 |
| 1.2.1 IBV重组鸭肠炎疫苗的制备 | 第58页 |
| 1.2.2 重组疫苗免疫保护性 | 第58页 |
| 1.2.3 IBV抗体滴度检测 | 第58页 |
| 1.2.4 荧光定量RT-PCR检测攻毒后排毒 | 第58-59页 |
| 1.2.5 统计学分析 | 第59页 |
| 2 结果 | 第59-62页 |
| 2.1 IBV重组鸭肠炎病毒活载体疫苗的制备 | 第59页 |
| 2.2 重组疫苗免疫SPF鸡后的抗体反应 | 第59-61页 |
| 2.3 重组疫苗的攻毒保护情况 | 第61-62页 |
| 2.3.1 发病率及死亡率 | 第61页 |
| 2.3.2 攻毒后排毒情况 | 第61-62页 |
| 2.3.3 攻毒后抗体水平变化 | 第62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73-74页 |
| 导师简介 | 第74-76页 |
