| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 ZAR1基因的研究进展及应用 | 第11-14页 |
| 1.1.1 ZAR1基因定位与结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 ZAR1基因的组织表达分布 | 第12页 |
| 1.1.3 ZAR1基因的功能研究 | 第12-14页 |
| 1.1.3.1 ZAR1基因对早期胚胎发育的作用 | 第12-13页 |
| 1.1.3.2 ZAR1基因对繁殖性状的影响 | 第13页 |
| 1.1.3.3 ZAR1基因甲基化与肿瘤的相互影响 | 第13-14页 |
| 1.1.3.4 ZAR1基因对基因转录的作用 | 第14页 |
| 1.1.4 展望 | 第14页 |
| 1.2 GDF9基因与ZAR1基因在繁殖方面的联系 | 第14-15页 |
| 1.3 GDF9基因的研究进展及应用 | 第15-19页 |
| 1.3.1 GDF9基因定位与结构 | 第16页 |
| 1.3.2 GDF9基因的组织表达分布 | 第16-17页 |
| 1.3.3 GDF9基因的功能研究 | 第17-19页 |
| 1.3.3.1 GDF9基因对卵泡发育的影响 | 第17页 |
| 1.3.3.2 GDF9基因对繁殖性状的影响 | 第17-18页 |
| 1.3.3.3 GDF9与BMP15的相互作用 | 第18-19页 |
| 1.3.4 小结 | 第19页 |
| 1.4 实时荧光定量PCR技术 | 第19-23页 |
| 1.4.1 实时荧光定量PCR原理 | 第19-20页 |
| 1.4.2 荧光标记方法的分类 | 第20-21页 |
| 1.4.2.1 非特异性的DNA结合染料法 | 第20页 |
| 1.4.2.2 特异性荧光定量PCR | 第20-21页 |
| 1.4.3 实时荧光定量PCR技术的的定量方法 | 第21页 |
| 1.4.4 实时荧光定量PCR技术的应用 | 第21-23页 |
| 1.4.4.1 目标基因的检测或诊断 | 第22页 |
| 1.4.4.2 细胞因子的表达分析 | 第22页 |
| 1.4.4.3 基因突变分析及多态性研究 | 第22页 |
| 1.4.4.4 转基因动物的检测 | 第22-23页 |
| 2 引言 | 第23-24页 |
| 3 ZAR1基因的克隆、生物信息分析和在新西兰白兔的组织表达分析 | 第24-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 3.1.1 菌体和克隆载体 | 第24页 |
| 3.1.2 试验动物组织样 | 第24页 |
| 3.1.3 主要仪器和设备 | 第24页 |
| 3.1.4 主要试剂和溶液 | 第24-25页 |
| 3.1.4.1 药品、酶及试剂盒 | 第24-25页 |
| 3.1.4.2 缓冲液及主要试剂的配制 | 第25页 |
| 3.2 ZAR1序列的克隆和序列分析 | 第25-31页 |
| 3.2.1 PCR引物设计和合成 | 第25-26页 |
| 3.2.2 动物组织DNA的提取 | 第26页 |
| 3.2.3 动物组织总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 3.2.4 反转录反应 | 第27页 |
| 3.2.5 反转录效果检测 | 第27-28页 |
| 3.2.6 普通PCR法扩增ZAR1基因序列 | 第28页 |
| 3.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第28-29页 |
| 3.2.8 DNA的克隆及重组质粒的筛选和鉴定 | 第29-31页 |
| 3.2.8.1 PCR产物的纯化和检测 | 第29页 |
| 3.2.8.2 PCR目的片段的连接 | 第29-30页 |
| 3.2.8.3 感受态细胞的制备（采用Ca Cl2法制备感受态细胞） | 第30页 |
| 3.2.8.4 连接产物的转化 | 第30页 |
| 3.2.8.5 蓝白斑筛选原理（α-互补法） | 第30-31页 |
| 3.2.8.6 高纯度质粒小量制备 | 第31页 |
| 3.2.8.7 重组质粒的PCR鉴定 | 第31页 |
| 3.2.8.8 重组质粒的序列测定 | 第31页 |
| 3.3 ZAR1 m RNA组织表达谱 | 第31-32页 |
| 3.3.1 总RNA的提取和反转录反应（方法同 3.2.3 和 3.2.4） | 第31-32页 |
| 3.3.2 RT-PCR | 第32页 |
| 3.3.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 3.4 ZAR1 m RNA在新西兰白兔组织的实时荧光定量表达分析 | 第32-33页 |
| 3.4.1 RNA提取和c DNA合成（方法同 3.2.3 和 3.2.4） | 第32页 |
| 3.4.2 PCR引物设计与扩增条件优化 | 第32页 |
| 3.4.3 实时荧光定量PCR的表达分析 | 第32-33页 |
| 3.5 结果 | 第33-44页 |
| 3.5.1 总RNA的提取结果 | 第33页 |
| 3.5.2 反转录反应中GAPDH内参引物的扩增 | 第33-34页 |
| 3.5.3 PCR法扩增ZAR1序列的结果 | 第34-35页 |
| 3.5.4 ZAR1序列阳性克隆的筛选和鉴定 | 第35-36页 |
| 3.5.5 ZAR1基因PCR产物的测序结果 | 第36-37页 |
| 3.5.6 新西兰白兔 ZAR1 基因 CDS 序列的生物信息学分析 | 第37-40页 |
| 3.5.6.1 新西兰白兔ZAR1蛋白进化树的构建 | 第37页 |
| 3.5.6.2 新西兰白兔ZAR1基因甲基化预测 | 第37-38页 |
| 3.5.6.3 新西兰白兔ZAR1蛋白的氨基酸理化性质分析 | 第38页 |
| 3.5.6.4 新西兰白兔ZAR1蛋白的疏水区分析 | 第38-39页 |
| 3.5.6.5 新西兰白兔ZAR1蛋白的二级结构分析 | 第39-40页 |
| 3.5.6.6 新西兰白兔ZAR1蛋白磷酸化位点预测 | 第40页 |
| 3.5.7 ZAR1 m RNA组织表达谱 | 第40页 |
| 3.5.8 ZAR1 m RNA在新西兰白兔组织的实时荧光定量表达分析 | 第40-44页 |
| 3.5.8.1 荧光定量PCR扩增曲线和溶解曲线 | 第40-41页 |
| 3.5.8.2 相同繁殖性状不同组织中ZAR1基因m RNA水平的差异比较 | 第41-43页 |
| 3.5.8.3 不同繁殖性状在同一组织中ZAR1基因m RNA水平的差异比较 | 第43-44页 |
| 3.6 讨论 | 第44-45页 |
| 3.7 小结 | 第45-47页 |
| 4 GDF9基因克隆、生物信息分析和在新西兰白兔的组织表达分析 | 第47-68页 |
| 4.1 实验材料（同 3.1） | 第47页 |
| 4.2 GDF9序列的克隆和序列分析 | 第47-48页 |
| 4.2.1 PCR引物设计和合成 | 第47页 |
| 4.2.2 动物组织DNA的提取(同 3.2.2) | 第47页 |
| 4.2.3 动物组织总RNA的提取（同 3.2.3） | 第47页 |
| 4.2.4 反转录反应（同 3.2.4） | 第47页 |
| 4.2.5 反转录效果检测（同 3.2.5） | 第47页 |
| 4.2.6 普通PCR法扩增GDF9基因序列 | 第47-48页 |
| 4.2.7 琼脂糖凝胶电泳（同 3.2.7） | 第48页 |
| 4.2.8 DNA的克隆及重组质粒的筛选和鉴定（同 3.2.8） | 第48页 |
| 4.3 GDF9 m RNA组织表达谱（方法同 3.3） | 第48页 |
| 4.4 GDF9 m RNA在新西兰白兔组织的实时荧光定量表达分析 | 第48-49页 |
| 4.4.1 RNA提取和c DNA合成（方法同 3.2.3 和 3.2.4） | 第48页 |
| 4.4.2 PCR引物设计与扩增条件优化 | 第48页 |
| 4.4.3 实时荧光定量PCR的表达分析 | 第48-49页 |
| 4.5 结果 | 第49-64页 |
| 4.5.1 总RNA的提取结果（同 3.5.1） | 第49页 |
| 4.5.2 反转录反应中GAPDH内参引物的扩增（同 3.5.2） | 第49页 |
| 4.5.3 PCR法扩增GDF9序列的结果 | 第49-50页 |
| 4.5.4 GDF9序列阳性克隆的筛选和鉴定 | 第50-51页 |
| 4.5.5 GDF9基因PCR产物的测序结果 | 第51-53页 |
| 4.5.6 新西兰白兔GDF9基因CDS序列的生物信息学分析 | 第53-56页 |
| 4.5.6.1 新西兰白兔GDF9蛋白进化树的构建 | 第53页 |
| 4.5.6.2 新西兰白兔GDF9基因启动子区的预测 | 第53页 |
| 4.5.6.3 新西兰白兔GDF9基因启动子区甲基化预测 | 第53-54页 |
| 4.5.6.4 新西兰白兔GDF9蛋白的的氨基酸理化性质分析 | 第54页 |
| 4.5.6.5 新西兰白兔GDF9蛋白的疏水区分析 | 第54-55页 |
| 4.5.6.6 新西兰白兔GDF9蛋白的二级结构分析 | 第55-56页 |
| 4.5.6.7 新西兰白兔GDF9蛋白磷酸化位点预测 | 第56页 |
| 4.5.7 GDF9 m RNA 组织表达谱 | 第56-57页 |
| 4.5.8 GDF9 m RNA在新西兰白兔组织的实时荧光定量表达分析 | 第57-60页 |
| 4.5.8.1 荧光定量PCR扩增曲线和溶解曲线 | 第57页 |
| 4.5.8.2 相同繁殖性状不同组织中GDF9基因m RNA水平的差异比较 | 第57-59页 |
| 4.5.8.3 不同繁殖性状在同一组织中GDF9基因m RNA水平的差异比较 | 第59-60页 |
| 4.5.9 GDF9基因和ZAR1基因在新西兰白兔不同组织中的表达研究比较 | 第60-64页 |
| 4.5.9.1 GDF9和ZAR1基因在低产新西兰白兔不同组织中的差异比较 | 第60-62页 |
| 4.5.9.2 GDF9和ZAR1基因在高产新西兰白兔不同组织中的差异比较 | 第62-64页 |
| 4.6 讨论 | 第64-66页 |
| 4.7 小结 | 第66-68页 |
| 5. 结论 | 第68-69页 |
| 6.创新点及下一步工作进展 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| ABSTRACT | 第76-78页 |
