| 摘要 | 第3-4页 |
| Summary | 第4-5页 |
| 缩写词英汉对照表 | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-13页 |
| 1.1 羊传染性脓疱病毒 | 第9-10页 |
| 1.1.1 概述 | 第9页 |
| 1.1.2 分子结构与主要毒力因子 | 第9页 |
| 1.1.3 病毒与宿主的免疫特性 | 第9-10页 |
| 1.2 microRNA | 第10-12页 |
| 1.2.1 概述 | 第10页 |
| 1.2.2 microRNA与信号通路 | 第10-11页 |
| 1.2.3 microRNA与肿瘤 | 第11页 |
| 1.2.4 microRNA与病毒 | 第11-12页 |
| 1.3 本研究目的及意义 | 第12-13页 |
| 第二章 ORFV感染宿主细胞microRNA的差异表达分析 | 第13-22页 |
| 1.1 材料 | 第13页 |
| 1.1.1 细胞与毒株 | 第13页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第13页 |
| 1.2 方法 | 第13-15页 |
| 1.2.1 GSFs细胞培养 | 第13页 |
| 1.2.2 ORFV培养及不同时间段的CPE分析 | 第13页 |
| 1.2.3 总RNA提取及鉴定 | 第13页 |
| 1.2.4 小RNA cDNA文库构建及solexa测序 | 第13-14页 |
| 1.2.5 测序结果生物信息学分析 | 第14-15页 |
| 1.3 结果 | 第15-21页 |
| 1.3.1 ORFV感染GSFs不同时间段的细胞形态 | 第15页 |
| 1.3.2 总RNA提取及检测 | 第15-16页 |
| 1.3.3 测序结果生物信息学分析 | 第16-21页 |
| 1.4 讨论 | 第21-22页 |
| 第三章 ORFV的VIR蛋白的多克隆抗体制备 | 第22-30页 |
| 1.1 材料 | 第22页 |
| 1.1.1 毒株、菌株和载体 | 第22页 |
| 1.1.2 工具酶及主要试剂 | 第22页 |
| 1.1.3 实验动物 | 第22页 |
| 1.2 方法 | 第22-26页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第23页 |
| 1.2.2 病毒DNA的提取 | 第23页 |
| 1.2.3 目的基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| 1.2.4 PCR产物回收 | 第24页 |
| 1.2.5 目的基因与载体的双酶切 | 第24页 |
| 1.2.6 目的基因与原核表达载体的连接 | 第24页 |
| 1.2.7 连接产物的转化 | 第24页 |
| 1.2.8 重组质粒的提取 | 第24页 |
| 1.2.9 重组质粒的PCR、酶切鉴定 | 第24页 |
| 1.2.10 重组VIR蛋白的诱导表达及鉴定 | 第24-25页 |
| 1.2.11 重组VIR蛋白的纯化 | 第25页 |
| 1.2.12 重组VIR蛋白的多克隆抗体制备 | 第25-26页 |
| 1.3 结果 | 第26-29页 |
| 1.3.1 ORFV VIR基因的PCR扩增 | 第26页 |
| 1.3.2 pET-28a-VIR原核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 1.3.3 VIR融合蛋白的表达与纯化 | 第27-28页 |
| 1.3.4 VIR融合蛋白的多克隆抗体制备 | 第28-29页 |
| 1.4 讨论 | 第29-30页 |
| 第四章 ORFV的VIR蛋白的细胞定位观察 | 第30-36页 |
| 1.1 材料 | 第30页 |
| 1.2 方法 | 第30-33页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第30-31页 |
| 1.2.2 病毒DNA的提取 | 第31页 |
| 1.2.3 目的基因的PCR扩增 | 第31页 |
| 1.2.4 PCR产物回收 | 第31页 |
| 1.2.5 目的基因与载体的双酶切 | 第31-32页 |
| 1.2.6 目的基因与真核表达载体的连接 | 第32页 |
| 1.2.7 连接产物的转化 | 第32页 |
| 1.2.8 重组质粒的提取 | 第32页 |
| 1.2.9 重组质粒的PCR、酶切鉴定 | 第32页 |
| 1.2.10 重组质粒的大量提取及浓度测定 | 第32页 |
| 1.2.11 细胞培养和重组质粒的转染 | 第32页 |
| 1.2.12 VIR融合蛋白在绵羊睾丸细胞中定位观察 | 第32-33页 |
| 1.3 结果 | 第33-35页 |
| 1.3.1 ORFV VIR基因的PCR扩增 | 第33页 |
| 1.3.2 pEGFP-VIR真核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 1.3.3 VIR蛋白在绵羊睾丸细胞中的定位观察 | 第34-35页 |
| 1.4 讨论 | 第35-36页 |
| 全文结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-42页 |
| 附录 | 第42-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59-60页 |
| 导师简介 | 第60-61页 |
