| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 引言 | 第12-25页 |
| 1.小鹅瘟的概况及危害 | 第12-13页 |
| 2 小鹅瘟病毒的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·GPV的分类及形态学特性 | 第13页 |
| ·理化特性 | 第13-14页 |
| ·培养特性 | 第14页 |
| 3 小鹅瘟病毒的分子生物学特性 | 第14-20页 |
| ·GPV基因组结构特点 | 第14-16页 |
| ·基因编码蛋白及其功能 | 第16-19页 |
| ·GPV的转录与复制 | 第19-20页 |
| 4.小鹅瘟病毒与其他细小病毒的关系 | 第20-21页 |
| ·小鹅瘟病毒与番鸭细小病毒的关系 | 第20-21页 |
| ·小鹅瘟病毒与依赖病毒属成员的关系 | 第21页 |
| ·小鹅瘟病毒与红病毒属成员的关系 | 第21页 |
| 5 小鹅瘟的诊断 | 第21-22页 |
| ·病毒的分离和鉴定 | 第21-22页 |
| ·血清学诊断方法 | 第22页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第22页 |
| 6 小鹅瘟的防制 | 第22-24页 |
| ·小鹅瘟传统疫苗 | 第22-23页 |
| ·小鹅瘟核酸疫苗 | 第23-24页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 材料与方法 | 第25-40页 |
| 1 材料 | 第25-29页 |
| ·病毒 | 第25页 |
| ·血清 | 第25页 |
| ·载体与菌株 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·试验所用溶液及其配制 | 第25-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-40页 |
| ·病料处理 | 第29页 |
| ·小鹅瘟病毒的传代 | 第29-30页 |
| ·小鹅瘟病毒DNA的提取 | 第30页 |
| ·引物设计与合成 | 第30-31页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第31页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第31页 |
| ·GPV VP3-DNA与pMD-18T simple载体重组连接 | 第31页 |
| ·重组连接后质粒DNA的转化 | 第31-32页 |
| ·重组克隆的筛选 | 第32页 |
| ·质粒DNA的小量制备(碱性裂解法) | 第32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·序列测定及分析 | 第33页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第35页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白Western-blotting分析 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第37页 |
| ·包涵体的鉴定 | 第37页 |
| ·亲和层析法纯化融合蛋白(Batch法) | 第37-38页 |
| ·BALB/c小鼠的免疫 | 第38页 |
| ·BALB/c小鼠的抗体效价检测 | 第38-40页 |
| 结果 | 第40-51页 |
| 1 PCR扩增 | 第40页 |
| 2 目的基因的克隆及重组质粒的鉴定 | 第40-45页 |
| ·目的基因的克隆 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第41页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第42-45页 |
| 3 重组表达载体的构建及鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的构建 | 第45页 |
| ·重组表达质粒的PCR鉴定及酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 4 重组表达载体PGEX-VP3的表达 | 第46-47页 |
| 5 融合蛋白Western-blotting分析 | 第47-48页 |
| 6 蛋白存在形式的鉴定 | 第48页 |
| 7 重组蛋白的亲和层析纯化 | 第48-49页 |
| 8 抗体效价检测结果 | 第49-51页 |
| 讨论 | 第51-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65-66页 |
| 附录(攻读学位期间发表论文目录) | 第66页 |