| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 一、文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 植物果实与发育成熟 | 第10页 |
| 1.2 果实呼吸跃变 | 第10页 |
| 1.3 甜瓜 | 第10-11页 |
| 1.4 几丁质酶研究概况 | 第11-14页 |
| 1.4.1 几丁质酶分类 | 第11-12页 |
| 1.4.2 几丁质酶生物学作用 | 第12-13页 |
| 1.4.2.1 微生物几丁质酶的作用 | 第12页 |
| 1.4.2.2 动物几丁质酶的作用 | 第12-13页 |
| 1.4.2.3 植物几丁质酶的作用 | 第13页 |
| 1.4.3 植物中几丁质酶研究进展 | 第13-14页 |
| 1.5 F-box家族基因研究概况 | 第14-20页 |
| 1.5.1 F-box蛋白结构 | 第14-15页 |
| 1.5.2 植物中F-box家族基因功能 | 第15-18页 |
| 1.5.2.1 F-box蛋白与植物的生长发育 | 第16-17页 |
| 1.5.2.2 F-box蛋白与植物的胁迫反应 | 第17页 |
| 1.5.2.3 F-box与植物的激素信号转导 | 第17-18页 |
| 1.5.3 植物乙烯信号转导途径中F-box家族基因作用 | 第18-20页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 二、材料与方法 | 第21-33页 |
| 2.1 研究材料 | 第21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 菌种质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 试剂 | 第21页 |
| 2.2 研究方法 | 第21-33页 |
| 2.2.1 候选基因筛选 | 第21-22页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第22-24页 |
| 2.2.3 生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.2.4 cDNA克隆 | 第24-26页 |
| 2.2.4.1 甜瓜总RNA提取 | 第24页 |
| 2.2.4.2 cDNA第一链合成 | 第24-25页 |
| 2.2.4.3 RT-PCR扩增 | 第25页 |
| 2.2.4.4 PCR产物纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.4.5 克隆载体的构建及转化 | 第26页 |
| 2.2.4.6 挑单克隆、划线 | 第26页 |
| 2.2.4.7 菌体PCR检测 | 第26页 |
| 2.2.4.8 克隆片段的测序 | 第26页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.2.5.1 cDNA第一链合成 | 第27页 |
| 2.2.5.2 qPCR反应 | 第27页 |
| 2.2.6 pPZP221超表达载体构建 | 第27-28页 |
| 2.2.6.1 摇菌提质粒 | 第27页 |
| 2.2.6.2 pPZP221载体酶切与纯化 | 第27页 |
| 2.2.6.3 目的片段酶切胶回收 | 第27页 |
| 2.2.6.4 超表达载体的构建及转化 | 第27-28页 |
| 2.2.6.5 挑单克隆、划线 | 第28页 |
| 2.2.6.6 菌体PCR检测 | 第28页 |
| 2.2.6.7 双酶切鉴定 | 第28页 |
| 2.2.6.8 比对测序结果 | 第28页 |
| 2.2.7 CRISPER/Cas9编辑载体构建 | 第28-30页 |
| 2.2.7.1 接头制备 | 第28页 |
| 2.2.7.2 第一次边切边连 | 第28-29页 |
| 2.2.7.3 第一轮PCR | 第29页 |
| 2.2.7.4 第二轮巢式PCR | 第29页 |
| 2.2.7.5 sgRNA表达盒胶回收 | 第29-30页 |
| 2.2.7.6 CRISPER/Cas9编辑载体构建及转化 | 第30页 |
| 2.2.7.7 挑单克隆、划线 | 第30页 |
| 2.2.7.8 菌体PCR鉴定 | 第30页 |
| 2.2.7.9 比对测序结果 | 第30页 |
| 2.2.8 甜瓜稳定转化 | 第30-31页 |
| 2.2.9 T_I代植株检测 | 第31-33页 |
| 2.2.9.1 提取基因组DNA | 第31页 |
| 2.2.9.2 转化植株载体检测 | 第31-32页 |
| 2.2.9.3 转化植株目的基因检测 | 第32-33页 |
| 三、结果与分析 | 第33-60页 |
| 3.1 生物信息学分析 | 第33-45页 |
| 3.1.1 候选基因转录组数据分析 | 第33页 |
| 3.1.2 编码蛋白一级结构分析 | 第33-36页 |
| 3.1.3 编码蛋白二、三级结构预测 | 第36-39页 |
| 3.1.4 信号肽与亚细胞定位预测 | 第39-41页 |
| 3.1.5 编码蛋白质系统进化树分析 | 第41-43页 |
| 3.1.6 保守基序分析 | 第43-45页 |
| 3.2 cDNA克隆 | 第45-46页 |
| 3.2.1 RT-PCR扩增产物分析 | 第45页 |
| 3.2.2 重组质粒的筛选 | 第45-46页 |
| 3.2.3 序列分析 | 第46页 |
| 3.3 实时荧光定量PCR检测 | 第46-48页 |
| 3.3.1 果实中表达模式分析 | 第46-47页 |
| 3.3.2 实时荧光定量PCR法验证转录组数据 | 第47-48页 |
| 3.4 pPZP221超表载体构建 | 第48-50页 |
| 3.4.1 超表达重组质粒菌体PCR检测 | 第48-49页 |
| 3.4.2 超表达重组质粒酶切鉴定 | 第49-50页 |
| 3.4.3 序列比对 | 第50页 |
| 3.5 CRISPER/Cas9编辑载体构建 | 第50-52页 |
| 3.5.1 中间载体构建 | 第50-51页 |
| 3.5.2 表达载体构建 | 第51-52页 |
| 3.6 甜瓜遗传转化 | 第52-60页 |
| 3.6.1 T_1代种子阳性检测 | 第52-57页 |
| 3.6.2 T_1代转化植株表型分析 | 第57-60页 |
| 四、讨论 | 第60-61页 |
| 五、结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66页 |