| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶基本概况 | 第11-12页 |
| 1.1.1 催化反应特点 | 第11页 |
| 1.1.2 CgDAPDH简介 | 第11-12页 |
| 1.1.3 StDAPDH简介 | 第12页 |
| 1.2 内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶在D-氨基酸合成中的应用 | 第12-15页 |
| 1.2.1 D-氨基酸的用途 | 第12-13页 |
| 1.2.2 meso-DAPDH用于制备D-氨基酸 | 第13-15页 |
| 1.3 内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶的亚家族分类 | 第15-16页 |
| 1.3.1 亚家族分类 | 第15页 |
| 1.3.2 高级结构对比 | 第15-16页 |
| 1.4 非活性位点与酶催化功能的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.4.1 非活性位点通过改变骨架柔性影响酶的的催化活性 | 第16-18页 |
| 1.4.2 非活性位点通过残基-残基相互作用影响酶的催化活性 | 第18-19页 |
| 1.5 本课题的研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 1.6 本课题的研究内容及技术路线 | 第20-22页 |
| 第二章 STDAPDH活性关键位点的探寻 | 第22-38页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 材料及设备 | 第22-26页 |
| 2.2.1 菌株和引物 | 第22页 |
| 2.2.2 主要试剂及主要试剂盒 | 第22-24页 |
| 2.2.3 主要缓冲液及配制方法 | 第24-25页 |
| 2.2.4 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-32页 |
| 2.3.1 分析关键位点 | 第26页 |
| 2.3.2 合成及处理引物 | 第26页 |
| 2.3.3 PCR定点突变 | 第26-27页 |
| 2.3.4 DpnI消化 | 第27页 |
| 2.3.5 制备感受态细胞 | 第27页 |
| 2.3.6 克隆宿主构建 | 第27-28页 |
| 2.3.7 测序 | 第28页 |
| 2.3.8 提取质粒 | 第28-29页 |
| 2.3.9 表达宿主构建 | 第29页 |
| 2.3.10 蛋白诱导表达 | 第29页 |
| 2.3.11 蛋白纯化 | 第29-31页 |
| 2.3.12 超滤目标蛋白 | 第31页 |
| 2.3.13 蛋白浓度测定 | 第31-32页 |
| 2.3.14 蛋白活性测定 | 第32页 |
| 2.3.15 动力学参数测定 | 第32页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第32-36页 |
| 2.4.1 CgDAPDH和StDAPDH中的保守位置分析 | 第32-34页 |
| 2.4.2 质粒提取结果及PCR定点突变结果 | 第34-35页 |
| 2.4.3 蛋白纯化结果 | 第35页 |
| 2.4.4 动力学参数测定结果及分析 | 第35-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-38页 |
| 第三章 STDAPDHR71胺化关键作用的进一步验证及机理分析 | 第38-56页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料及设备 | 第38-39页 |
| 3.2.1 菌株和引物 | 第38-39页 |
| 3.2.2 主要化学试剂及主要试剂盒 | 第39页 |
| 3.2.3 主要缓冲液及配制方法 | 第39页 |
| 3.2.4 主要仪器设备 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.3.1 合成及处理引物 | 第39页 |
| 3.3.2 PCR定点突变 | 第39页 |
| 3.3.3 克隆宿主的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.4 挑斑养菌检测 | 第40页 |
| 3.3.5 提取质粒 | 第40页 |
| 3.3.6 表达宿主的构建 | 第40页 |
| 3.3.7 蛋白诱导表达 | 第40页 |
| 3.3.8 蛋白纯化 | 第40页 |
| 3.3.9 超滤目标蛋白 | 第40页 |
| 3.3.10 蛋白浓度测定 | 第40页 |
| 3.3.11 蛋白活性测定 | 第40页 |
| 3.3.12 动力学参数测定 | 第40-41页 |
| 3.3.13 分子对接和分子动力学(MD)模拟 | 第41页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第41-54页 |
| 3.4.1 PCR定点突变结果 | 第41-42页 |
| 3.4.2 质粒提取结果 | 第42-43页 |
| 3.4.3 蛋白表达及纯化结果 | 第43-44页 |
| 3.4.4 动力学参数测定结果及分析 | 第44-48页 |
| 3.4.5 野生型StDAPDH及其突变体R71A的MD分析 | 第48-50页 |
| 3.4.6 辅因子NADP(H)和底物与野生型StDAPDH和突变体R71A的相互作用分析 | 第50-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 结果与展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 在读期间公开发表的论文 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
