| 缩写词 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-15页 |
| Abstract | 第15-21页 |
| 第一章 引言 | 第22-34页 |
| 1 龙眼体细胞胚胎发生研究进展 | 第23-24页 |
| 2 植物DRM蛋白研究进展 | 第24-25页 |
| 3 植物lmiRNA介导的DNA甲基化 | 第25-26页 |
| 4 植物中DNA甲基化研究进展 | 第26-31页 |
| 4.1 DNA甲基化概念及特征 | 第26-27页 |
| 4.2 DNA甲基化的产生及维持机制 | 第27-28页 |
| 4.2.1 DNA甲基转移酶 | 第27-28页 |
| 4.2.2 DNA甲基化的维持 | 第28页 |
| 4.3 DNA甲基化的生物学功能 | 第28-29页 |
| 4.3.1 DNA甲基化与植物正常生长发育 | 第28-29页 |
| 4.3.2 DNA甲基化与逆境胁迫 | 第29页 |
| 4.4 体细胞无性系变异和胚性细胞系的DNA甲基化 | 第29-30页 |
| 4.5 DNA甲基化抑制剂 | 第30-31页 |
| 5 研究的意义及主要内容 | 第31-34页 |
| 5.1 研究意义 | 第31-32页 |
| 5.2 研究的主要内容 | 第32-34页 |
| 第二章 DlDRMs家族基因的克隆与生物信息学分析 | 第34-47页 |
| 1 材料与方法 | 第34-36页 |
| 1.1 材料 | 第34页 |
| 1.2 方法 | 第34-36页 |
| 1.2.1 总RNA提取及逆转录 | 第34-35页 |
| 1.2.2 转录组数据分析DlDRM1和DlDRM2基因序列的获得 | 第35页 |
| 1.2.3 DlDRM1和DlDRM2基因序列的获得 | 第35-36页 |
| 1.2.4 DlDRM1和DlDRM2基因生物信息学分析 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-46页 |
| 2.1 DlDRM1基因的克隆 | 第36-37页 |
| 2.2 DlDRM2基因的克隆 | 第37-38页 |
| 2.3 DlDRMs理化性质分析 | 第38-39页 |
| 2.4 DlDRMs信号肽及亚细胞定位预测 | 第39-40页 |
| 2.5 DlDRMs跨膜螺旋结构预测与分析 | 第40-41页 |
| 2.6 DlDRMs磷酸化位点预测 | 第41-42页 |
| 2.7 DlDRMs卷曲螺旋结构预测 | 第42-43页 |
| 2.8 DlDRMs二级结构和三级结构预测 | 第43-44页 |
| 2.9 DlDRMs保守结构域预测 | 第44-45页 |
| 2.10 DlDRMs同源性及进化分析 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| 3.1 DlDRMs家族具备Dcm和UBA结构域 | 第46页 |
| 3.2 DlDRMs家族的进化 | 第46-47页 |
| 第三章 龙眼DlDRM1与DlDRM2的亚细胞定位分析 | 第47-56页 |
| 1 材料与方法 | 第47-51页 |
| 1.1 材料 | 第47-48页 |
| 1.1.1 受体材料 | 第47页 |
| 1.1.2 菌株与载体 | 第47页 |
| 1.1.3 实验试剂 | 第47-48页 |
| 1.1.4 实验仪器 | 第48页 |
| 1.2 方法 | 第48-51页 |
| 1.2.1 龙眼总RNA提取与cDNA合成 | 第48页 |
| 1.2.2 在基因序列上进行酶切位点分析 | 第48页 |
| 1.2.3 引物设计及PCR扩增 | 第48-49页 |
| 1.2.4 目的片段及载体的质粒提取与酶切回收 | 第49页 |
| 1.2.5 pCAMBIA1302-目的片段-GFP构建 | 第49-50页 |
| 1.2.6 重组质粒转化农杆菌及保存 | 第50页 |
| 1.2.7 洋葱内表皮细胞瞬时表达 | 第50-51页 |
| 1.2.8 共聚焦显微镜观察荧光信号 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-54页 |
| 2.1 目的基因与载体酶切位点选择分析 | 第51页 |
| 2.2 目的基因与载体的连接及重组载体的鉴定 | 第51-52页 |
| 2.3 DlDRM1蛋白的亚细胞定位 | 第52-53页 |
| 2.4 DlDRM2蛋白的亚细胞定位 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 3.1 运用注射法进行洋葱亚细胞定位分析 | 第54-55页 |
| 3.2 DlDRM1和DlDRM2均属于核定位蛋白 | 第55页 |
| 3.3 DlDRM1属于膜定位蛋白 | 第55-56页 |
| 第四章 DlDRM1与DlDRM2启动子克隆与分析 | 第56-65页 |
| 1 材料方法 | 第56-58页 |
| 1.1 材料 | 第56页 |
| 1.2 方法 | 第56-58页 |
| 1.2.1 DNA提取 | 第56页 |
| 1.2.2 龙眼DlDRMs基因家族不同成员启动子序列的获得和克隆 | 第56-57页 |
| 1.2.3 龙眼DlDRMs基因家族不同成员启动子序列的分析 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-64页 |
| 2.1 龙眼DlDRMs基因家族启动子获得 | 第58页 |
| 2.2 龙眼DlDRMs基因家族启动子分析 | 第58-64页 |
| 2.2.1 光反应元件分析 | 第59-61页 |
| 2.2.2 激素元件分析 | 第61页 |
| 2.2.3 逆境响应元件分析 | 第61-62页 |
| 2.2.4 植物生长响应元件分析 | 第62页 |
| 2.2.5 功能未知响应元件分析 | 第62-64页 |
| 3 讨论 | 第64-65页 |
| 第五章 DlDRMs基因的定量表达分析 | 第65-80页 |
| 第一节 龙眼组织器官及体胚发育过程中DlDRMs的表达分析 | 第65-71页 |
| 1 材料与方法 | 第65-67页 |
| 1.1 材料 | 第65-66页 |
| 1.2 方法 | 第66-67页 |
| 1.2.1 RNA的提取和cDNA的合成 | 第66页 |
| 1.2.2 引物设计和分析 | 第66-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-69页 |
| 2.1 DlDRMs在龙眼不同组织器官中的表达模式分析 | 第67-68页 |
| 2.2 DlDRMs在龙眼体胚发生过程中的表达模式分析 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 3.1 DlDRMs在龙眼不同组织器官中的表达呈现组织特异性 | 第69-70页 |
| 3.2 DlDRMs在龙眼体胚发生过程中发挥着重要调控作用 | 第70-71页 |
| 第二节 激素和非生物胁迫条件下龙眼DlDRMs的表达分析 | 第71-80页 |
| 1 材料与方法 | 第71-72页 |
| 1.1 材料 | 第71页 |
| 1.2 方法 | 第71-72页 |
| 1.2.1 激素及不同非生物胁迫处理材料的获得 | 第71-72页 |
| 1.2.2 总RNA提取及逆转录 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-79页 |
| 2.1 不同激素处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第72-76页 |
| 2.1.1 不同浓度2,4-D处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第72-73页 |
| 2.1.2 不同浓度KT处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第73页 |
| 2.1.3 不同浓度SA处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第73-74页 |
| 2.1.4 不同浓度5-azac处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第74-75页 |
| 2.1.5 不同浓度GA3处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第75页 |
| 2.1.6 不同浓度ABA处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第75-76页 |
| 2.2 非生物胁迫处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第76-79页 |
| 2.2.1 不同蔗糖处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第76-77页 |
| 2.2.2 不同温度处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第77页 |
| 2.2.3 盐胁迫处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第77-78页 |
| 2.2.4 不同光质处理下DlDRMs的表达模式分析 | 第78-79页 |
| 3 讨论 | 第79-80页 |
| 3.1 龙眼DlDRMs可能响应植物激素调控 | 第79页 |
| 3.2 龙眼DlDRMs可能响应非生物胁迫响应 | 第79-80页 |
| 第六章 龙眼DlDRMs基因沉默对体胚发生早期的影响 | 第80-87页 |
| 1 材料与方法 | 第80-81页 |
| 1.1 材料 | 第80-81页 |
| 1.2 方法 | 第81页 |
| 1.2.1 靶点siRNA筛选 | 第81页 |
| 1.2.2 DlDRMs抑制表达对家族成员的影响 | 第81页 |
| 1.2.3 DlDRMs抑制表达对龙眼体胚发生的影响 | 第81页 |
| 2 结果与分析 | 第81-86页 |
| 2.1 靶点siRNA筛选 | 第81-82页 |
| 2.2 DlDRMs抑制表达对家族成员的影响 | 第82-84页 |
| 2.2.1 DlDRM1抑制(drm1)表达对DlDRMs的影响 | 第82-83页 |
| 2.2.2 DlDRM2抑制(drm2)表达对DlDRMs的影响 | 第83页 |
| 2.2.3 DlDRM1/DlDRM2同时抑制表达对DlDRMs家族成员的影响 | 第83-84页 |
| 2.3 DlDRMs沉默后对龙眼体胚形态建成的影响 | 第84-86页 |
| 3 讨论 | 第86-87页 |
| 3.1 DlDRM1和DlDRM2之间的关系 | 第86页 |
| 3.2 DlDRMs家族成员对早期体胚分化的影响 | 第86-87页 |
| 第七章 结论与展望 | 第87-90页 |
| 1 结论 | 第87-88页 |
| 1.1 DlDRM1和DlDRM2基因cDNA序列的获得和生物信息学分析 | 第87页 |
| 1.2 DlDRM1和DlDRM2亚细胞定位分析 | 第87页 |
| 1.3 DlDRM1和DlDRM2基因的的启动子克隆与分析 | 第87-88页 |
| 1.4 DlDRM1和DlDRM2基因的定量表达分析 | 第88页 |
| 1.5 龙眼DlDRMs基因沉默对体胚发生早期的影响 | 第88页 |
| 2 论文的创新 | 第88-89页 |
| 2.1 龙眼胚性愈伤组织分离DRM类DNA甲基转移酶 | 第88页 |
| 2.2 龙眼胚性愈伤组织中DlDRM基因启动子的克隆、分析与定量表达 | 第88页 |
| 2.3 运用寡核苷酸沉默技术筛选突变胚性细胞系 | 第88-89页 |
| 3 展望 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-102页 |
| 附录 | 第102-109页 |
| 1 龙眼胚性培养物DlDRMs基因家族的cDNA序列信息 | 第102-106页 |
| 2 龙眼胚性培养物DlDRMs基因家族的启动子序列信息 | 第106-109页 |
| 在学硕士期间发表论文、获奖及参与学术会议的情况 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110页 |
