| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-43页 |
| 1.1 立题背景及意义 | 第14-16页 |
| 1.2 奶牛乳房炎概述 | 第16-21页 |
| 1.2.1 奶牛乳房炎分类 | 第16-17页 |
| 1.2.1.1 临床型乳房炎 | 第16页 |
| 1.2.1.2 亚临床型乳房炎 | 第16-17页 |
| 1.2.2 奶牛乳房炎危害 | 第17-18页 |
| 1.2.3 奶牛乳房炎主要病原及诱因 | 第18-21页 |
| 1.2.3.1 病原微生物感染方面的因素 | 第18-20页 |
| 1.2.3.2 营养因素 | 第20页 |
| 1.2.3.3 环境因素 | 第20页 |
| 1.2.3.4 其它因素 | 第20-21页 |
| 1.3 链球菌性乳房炎 | 第21-30页 |
| 1.3.1 链球菌属致病菌 | 第21-22页 |
| 1.3.2 链球菌性乳房炎的致病机理及乳腺免疫机制 | 第22-23页 |
| 1.3.3 奶牛乳房炎的诊断与链球菌属致病菌的检测方法 | 第23-29页 |
| 1.3.3.1 传统的致病菌分离鉴定法 | 第24页 |
| 1.3.3.2 乳汁体细胞计数 | 第24-25页 |
| 1.3.3.3 乳汁导电性检测 | 第25-26页 |
| 1.3.3.4 乳汁pH测定 | 第26页 |
| 1.3.3.5 乳成分直接检测法 | 第26页 |
| 1.3.3.6 生化和其他检查 | 第26-27页 |
| 1.3.3.7 免疫学检测方法 | 第27页 |
| 1.3.3.8 分子生物学检测方法 | 第27-29页 |
| 1.3.4 奶牛链球菌性乳房炎的治疗与控制 | 第29-30页 |
| 1.4 环介导等温扩增(LAMP)技术 | 第30-43页 |
| 1.4.1 LAMP技术概述 | 第30-31页 |
| 1.4.2 LAMP技术的特点 | 第31-32页 |
| 1.4.3 LAMP引物设计的基本原理 | 第32-35页 |
| 1.4.4 LAMP技术的基本原理 | 第35-39页 |
| 1.4.5 LAMP反应体系的建立 | 第39页 |
| 1.4.6 LAMP扩增产物的检测方法 | 第39-41页 |
| 1.4.7 LAMP技术在微生物检测中的应用及前景 | 第41-43页 |
| 1.4.7.1 应用LAMP技术进行细菌的检测 | 第41页 |
| 1.4.7.2 应用LAMP技术进行病毒的检测 | 第41-42页 |
| 1.4.7.3 应用LAMP技术进行其它方而的检测 | 第42-43页 |
| 第二部分 试验研究 | 第43-78页 |
| 2 材料与方法 | 第44-56页 |
| 2.1 试验材料与仪器 | 第44-47页 |
| 2.1.1 试验菌株 | 第44页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第44-45页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第45页 |
| 2.1.4 主要药品与生化试剂 | 第45-46页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制方法 | 第46-47页 |
| 2.2 试验方法 | 第47-49页 |
| 2.2.1 菌种的保存、活化、培养和鉴定 | 第47-48页 |
| 2.2.2 细菌DNA模板的提取 | 第48-49页 |
| 2.3 LAMP引物设计 | 第49-50页 |
| 2.4 LAMP反应体系及主要操作 | 第50-51页 |
| 2.4.1 LAMP及PCR反应体系的建立 | 第50页 |
| 2.4.2 LAMP与PCR反应的主要操作程序 | 第50-51页 |
| 2.5 LAMP反应体系的条件优化 | 第51-53页 |
| 2.5.1 最佳Mg~(2+)浓度的选择 | 第51页 |
| 2.5.2 最佳反应温度的筛选 | 第51-52页 |
| 2.5.3 最佳dNTP浓度的筛选 | 第52页 |
| 2.5.4 内外引物浓度比筛选 | 第52页 |
| 2.5.5 甜菜碱Betaine浓度对LAMP反应的影响 | 第52页 |
| 2.5.6 反应时间对LAMP反应的影响 | 第52-53页 |
| 2.6 可视化LAMP方法的建立 | 第53页 |
| 2.7 LAMP检测链球菌的特异性试验 | 第53页 |
| 2.8 链球菌的灵敏度检测 | 第53-54页 |
| 2.9 LAMP扩增产物的分析 | 第54页 |
| 2.9.1 LAMP扩增产物的眼观结果分析 | 第54页 |
| 2.9.2 LAMP扩增产物的凝胶成像分析 | 第54页 |
| 2.10 LAMP法检测人工污染牛奶中链球菌的方法验证 | 第54-55页 |
| 2.11 临床样本检测试验 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-69页 |
| 3.1 LAMP反应条件的优化 | 第56-62页 |
| 3.1.1 Mg~(2+)浓度的优化 | 第56-57页 |
| 3.1.2 反应温度的优化 | 第57-58页 |
| 3.1.3 dNTP浓度的优化 | 第58-59页 |
| 3.1.4 内外引物浓度比的优化 | 第59-60页 |
| 3.1.5 甜菜碱Betaine浓度对LAMP反应的影响 | 第60-61页 |
| 3.1.6 反应时间对LAMP反应的影响 | 第61-62页 |
| 3.2 可视化LAMP方法的建立及扩增产物的分析 | 第62-63页 |
| 3.3 LAMP检测链球菌的特异性试验 | 第63-65页 |
| 3.4 LAMP检测链球菌的灵敏度 | 第65-67页 |
| 3.5 LAMP法检测人工污染牛奶中链球菌的方法验证 | 第67-68页 |
| 3.6 临床样本的检测试验 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-76页 |
| 4.1 建立可视化LAMP方法检测链球菌性乳房炎致病菌的重要性 | 第69-70页 |
| 4.2 目的基因的选择 | 第70-71页 |
| 4.3 LAMP反应条件的优化 | 第71-72页 |
| 4.3.1 Mg~(2+)浓度 | 第71页 |
| 4.3.2 反应温度 | 第71页 |
| 4.3.3 dNTP浓度 | 第71-72页 |
| 4.4 普通LAMP法易造成污染 | 第72-73页 |
| 4.5 LAMP产物可视化 | 第73-74页 |
| 4.6 模板制备方法的选择 | 第74页 |
| 4.7 LAMP法检测链球菌与传统微生物分离鉴定法、PCR方法的比较 | 第74-75页 |
| 4.8 LAMP技术发展前景展望 | 第75-76页 |
| 5 结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-89页 |
| 硕士期间发表学术论文 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
