| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-51页 |
| ·铁的生理机能和铁的生物有效性 | 第13页 |
| ·微生物铁载体的种类与结构 | 第13-16页 |
| ·微生物铁载体的作用 | 第16-21页 |
| ·微生物铁载体与植物的作用 | 第16-18页 |
| ·铁载体的抗癌、抗病毒、抗氧化作用 | 第18-19页 |
| ·类酚氧化酶活性 | 第19-20页 |
| ·环境修复 | 第20-21页 |
| ·微生物铁载体的合成过程 | 第21-23页 |
| ·假单胞菌铁载体 | 第23-25页 |
| ·微生物铁载体相关基因研究现状 | 第25-37页 |
| ·Enterobactin 的合成及相关基因 | 第26-27页 |
| ·Pyoverdine 的合成及相关基因 | 第27-29页 |
| ·Pyochelin 的合成及相关基因 | 第29-32页 |
| ·Vibriobactin 的合成及相关基因 | 第32-34页 |
| ·Anguibactin 的合成及相关基因 | 第34-35页 |
| ·Yersiniabactin 的合成及相关基因 | 第35-37页 |
| ·微生物从铁载体获取铁的机制 | 第37-40页 |
| ·转座子诱变法基因克隆 | 第40-46页 |
| ·细菌转座子的插入机制和随机诱变作用 | 第41-43页 |
| ·转座子标签技术 | 第43-46页 |
| ·PurL 基因 | 第46-49页 |
| ·立题依据、研究内容及技术路线 | 第49-51页 |
| ·立题依据 | 第49页 |
| ·研究内容 | 第49-50页 |
| ·技术路线 | 第50-51页 |
| 2. 材料与方法 | 第51-68页 |
| ·菌株与质粒 | 第51页 |
| ·培养基与培养液 | 第51页 |
| ·实验试剂及仪器 | 第51-54页 |
| ·铁载体检测（CAS 法）试剂 | 第51-52页 |
| ·DNA 提取试剂 | 第52页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒试剂 | 第52-53页 |
| ·CaC12 法制备新鲜的DH5α感受态细胞试剂 | 第53页 |
| ·PCR 试剂 | 第53页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-68页 |
| ·抗生素固体培养基的制备 | 第54页 |
| ·铁载体定性检测 | 第54-55页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第55页 |
| ·PCR 引物 | 第55-57页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第57页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第57页 |
| ·DNA 凝胶回收 | 第57-58页 |
| ·DNA 浓度的确定 | 第58页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第58-59页 |
| ·CaC1_2 法制备新鲜的DH5α感受态细胞 | 第59页 |
| ·突变株的筛选 | 第59-62页 |
| ·抗药性实验 | 第59-60页 |
| ·转座子诱变 | 第60页 |
| ·铁载体合成能力变化突变株的复筛 | 第60页 |
| ·种特异性引物PCR 验证 | 第60-61页 |
| ·LuxA PCR 验证 | 第61-62页 |
| ·PCR 产物与载体连接 | 第62页 |
| ·克隆中插入片断的验证 | 第62-64页 |
| ·质粒大小快速检测 | 第62-63页 |
| ·酶切验证插入片断的大小 | 第63页 |
| ·菌落PCR 验证插入片断的大小 | 第63-64页 |
| ·TAIL-PCR 引物的设计 | 第64-66页 |
| ·特异性引物的设计 | 第64-65页 |
| ·随机兼并引物的设计 | 第65-66页 |
| ·TAIL-PCR 反应体系的设计 | 第66页 |
| ·TAIL-PCR 反应条件的设计 | 第66-67页 |
| ·转座子Tn5-1063a 右侧翼及左侧翼序列的获得 | 第67页 |
| ·启动子区的寻找 | 第67-68页 |
| ·系统发育分析 | 第68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-83页 |
| ·G-229-21T 铁载体产生能力检测 | 第68页 |
| ·G-229-21TA 铁载体产生能力缺失检测 | 第68-69页 |
| ·菌株基因组提取 | 第69页 |
| ·特异性引物扩增验证 | 第69-70页 |
| ·luxA PCR 扩增和测序验证 | 第70-71页 |
| ·转座子Tn5-1063a 右侧翼序列的获得 | 第71-72页 |
| ·转座子Tn5-1063a 左侧翼序列的获得 | 第72-74页 |
| ·PurL 基因全序列的克隆 | 第74-78页 |
| ·特异性扩增引物的设计 | 第74页 |
| ·特异性扩增 | 第74-77页 |
| ·ORF 分析 | 第77页 |
| ·PurL 基因系统发育分析 | 第77-78页 |
| ·启动子区的寻找 | 第78-83页 |
| ·TAIL-PCR 扩增上游 | 第78-79页 |
| ·获得66106p 片段 | 第79-83页 |
| 4. 讨论 | 第83-85页 |
| ·PurL 基因 | 第83-84页 |
| ·PurL 基因与铁载体合成或运输过程的关系 | 第84-85页 |
| 5 结论 | 第85-87页 |
| ·结论 | 第85页 |
| ·尚待完成的工作 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第106页 |