| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 材料和方法 | 第13-32页 |
| 1 材料 | 第13-18页 |
| 1.1 载体 | 第13页 |
| 1.2 菌株和细胞系 | 第13页 |
| 1.3 主要试剂 | 第13-15页 |
| 1.4 主要试剂盒 | 第15页 |
| 1.5 主要仪器 | 第15-16页 |
| 1.6 常用培养基和缓冲液的配制 | 第16-18页 |
| 2 实验方法 | 第18-32页 |
| 2.1 CRISPR/Cas9切割载体构建 | 第18-24页 |
| 2.2 转染HEK293T细胞筛选高效率sgRNA表达载体 | 第24-25页 |
| 2.3 流式分选目的细胞并建立单克隆细胞株 | 第25-28页 |
| 2.4 SST蛋白表达 | 第28页 |
| 2.5 敲除SST对细胞功能学的影响检测 | 第28-30页 |
| 2.6 SEM5A、KLF2蛋白表达变化 | 第30-31页 |
| 2.7 统计学处理 | 第31-32页 |
| 结果 | 第32-42页 |
| 1 CRISPR/Cas9切割载体构建成功 | 第32-33页 |
| 1.1 px330-SST-sgRNA载体的酶切鉴定结果 | 第32页 |
| 1.2 pmcherryEGFP-SST-reporter载体的酶切鉴定结果 | 第32-33页 |
| 2 筛选出高效率sgRNA表达载体 | 第33-35页 |
| 2.1 转染HEK293T细胞观察绿色荧光蛋白表达 | 第33-34页 |
| 2.2 流式分析 | 第34-35页 |
| 3 分选出目的细胞得到单克隆细胞株 | 第35-37页 |
| 3.1 分选细胞单克隆培养 | 第35-36页 |
| 3.2 提取基因组PCR | 第36页 |
| 3.3 测序验证 | 第36-37页 |
| 4 SST蛋白表达 | 第37-38页 |
| 5 细胞生物功能检测 | 第38-41页 |
| 5.1 细胞形态变化 | 第38页 |
| 5.2 细胞Transwell实验 | 第38-39页 |
| 5.3 细胞划痕实验 | 第39-40页 |
| 5.4 MTT实验 | 第40-41页 |
| 6 SEM5A和KLF2蛋白表达 | 第41-42页 |
| 6.1 Westernblotting | 第41页 |
| 6.2 激光共聚焦检测免疫细胞荧光 | 第41-42页 |
| 讨论 | 第42-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-50页 |
| 综述 | 第50-68页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 个人简历 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
