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Stemphylium eturmiunum asf1基因敲除突变株的构建及其生物学特性研究

中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1 前言第12-26页
    1.1 匍柄霉属研究概述第12-13页
        1.1.1 新西兰匍柄霉(Stemphyliumeturmiunum)的分类地位及其生物学特性第12-13页
        1.1.2 对S.eturmiunum开展研究的经济重要性第13页
    1.2 真菌生殖的研究进展第13-17页
        1.2.1 无性与有性进化分析第13-14页
        1.2.2 真菌中与有性生殖相关的基因第14-17页
    1.3 asf1基因的研究进展第17-23页
        1.3.1 组蛋白分子伴侣家族概述第17-18页
        1.3.2 asf1基因的发现及克隆第18-19页
        1.3.3 asf1基因的基本结构第19-21页
        1.3.4 asf1基因的生物学功能第21-23页
    1.4 转录组学研究进展及应用第23-24页
        1.4.1 转录组学研究概况第23-24页
        1.4.2 转录组学研究的应用第24页
    1.5 本研究的科学意义第24-26页
2 材料与方法第26-49页
    2.1 实验材料第26-31页
        2.1.1 常用菌株与质粒第26页
        2.1.2 主要酶及试剂第26页
        2.1.3 主要仪器第26-27页
        2.1.4 主要培养基配方第27-28页
        2.1.5 主要溶液配方第28-31页
    2.2 实验方法第31-49页
        2.2.1 S.eturmiunumasf1基因的克隆及鉴定第31-37页
        2.2.2 asf1基因的生物信息学分析第37页
        2.2.4 敲除载体pXEH-asf1的构建第37-40页
        2.2.5 根癌农杆菌介导的S.eturmiunum遗传转化系统的建立第40-41页
        2.2.6 转化子的筛选及初步验证第41-42页
        2.2.7 Southernblot检测潮霉素拷贝数第42-46页
        2.2.8 转化子生物学性状分析第46-47页
        2.2.9 野生型菌株和转化子菌株的无参转录组分析第47-49页
3 结果与分析第49-68页
    3.0 asf1基因的克隆与鉴定第49-50页
    3.1 asf1基因的生物信息学分析第50-52页
        3.1.1 asf1基因的序列分析第50-51页
        3.1.2 asf1基因的序列一致性和聚类分析第51-52页
    3.2 敲除载体pXEH-asf1的构建第52-54页
        3.2.1 asf1基因左右侧翼序列的克隆及鉴定第52-53页
        3.2.2 重组敲除载体pXEH-asf1的构建第53-54页
    3.3 根癌农杆菌介导的S.eturmiunum遗传转化系统的建立第54-55页
        3.3.1 抑制S.eturmiunum野生型生长的HygB最佳浓度筛选第54-55页
    3.4 S.eturmiunum的遗传转化及asf1基因敲除转化子的筛选鉴定第55-57页
        3.4.1 敲除转化子的获得及验证第55页
        3.4.2 敲除转化子的PCR分析第55-56页
        3.4.3 敲除转化子的Southernblot分析第56-57页
    3.5 转化子的生物学性状分析第57-63页
        3.5.1 S.eturmiunum野生型菌株和敲除转化子菌落形态的观察及其生长速率的测定第57-58页
        3.5.2 野生型菌株和敲除转化子菌丝形态观察第58-59页
        3.5.3 野生型菌株和敲除转化子分生孢子及分生孢子梗形态观察第59-60页
        3.5.4 野生型菌株和敲除转化子有性态的诱导第60-62页
        3.5.5 野生型菌株和敲除转化子细胞核分布情况分析第62-63页
    3.6 野生型菌株和敲除转化子的无参转录组分析第63-68页
        3.6.1 野生型菌株和敲除转化子高质量RNA的提取第63-64页
        3.6.2 野生型菌株和敲除转化子转录组测序及分析第64-68页
4 结论与讨论第68-70页
    4.1 S.eturmiunumasf1基因的克隆与鉴定第68页
    4.2 asf1基因对S.eturmiunum有性及无性发育的影响第68-70页
参考文献第70-84页
致谢第84-85页
攻读硕士学位期间发表论文情况第85页

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