| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 一、引言 | 第13-24页 |
| 1.1 棉纤维发育及其机制研究 | 第13-16页 |
| 1.1.1 棉纤维起始 | 第13-14页 |
| 1.1.2 棉纤维伸长发育 | 第14-15页 |
| 1.1.3 棉纤维次生壁加厚 | 第15-16页 |
| 1.1.4 棉纤维成熟 | 第16页 |
| 1.2 DUF231结构域相关的研究进展 | 第16-23页 |
| 1.2.1 果胶 | 第16-17页 |
| 1.2.2 果胶甲基酯化酶(PME) | 第17-22页 |
| 1.2.3 PME抑制蛋白(PMEI) | 第22-23页 |
| 1.3 立题依据及研究意义 | 第23-24页 |
| 二、材料与方法 | 第24-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌种和载体 | 第24页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.3 化学试剂及其它材料 | 第24页 |
| 2.1.4 工具酶 | 第24页 |
| 2.1.5 常用的实验储液以及相应的浓度 | 第24-25页 |
| 2.1.6 常用培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.7 PCR分析扩增试剂 | 第26页 |
| 2.1.8 DNA测序 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 电子克隆基因序列 | 第26页 |
| 2.2.2 调取启动子序列 | 第26-27页 |
| 2.2.3 3 ’端RACE方法获得基因序列 | 第27-28页 |
| 2.2.4 棉花GhDUF231L1基因组织表达分析 | 第28页 |
| 2.2.5 拟南芥的培养以及农杆菌介导的遗传转化 | 第28-29页 |
| 2.2.6 拟南芥gDNA的提取 | 第29页 |
| 2.2.7 拟南芥总RNA的提取、纯化以及逆转录 | 第29-30页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳中DNA片段的回收 | 第30页 |
| 2.2.9 大肠杆菌DH5a和BL21感受态细胞的制备和转化 | 第30页 |
| 2.2.10 碱裂解法提取质粒 | 第30-31页 |
| 2.2.11 GhDUF231L1启动子表达模式分析以及启动子截短实验 | 第31-32页 |
| 2.2.12 GhDUF231L1-eGFP融合载体的构建以及eGFP荧光观察 | 第32-33页 |
| 2.2.13 GhDUF231L1过量表达载体的构建及转基因拟南芥的表型分析 | 第33页 |
| 2.2.14 徒手切片 | 第33页 |
| 2.2.15 石蜡切片 | 第33页 |
| 2.2.16 纤维素含量测定 | 第33页 |
| 2.2.17 拟南芥细胞壁组分的提取以及多糖衍生化 | 第33页 |
| 2.2.18 气相色谱分析 | 第33-34页 |
| 2.2.19 棉花遗传转化 | 第34-35页 |
| 三、结果与分析 | 第35-56页 |
| 3.1 GhDUF231L1基因序列分析 | 第35-36页 |
| 3.1.1 GhDUF231L1进化树分析 | 第35页 |
| 3.1.2 GhDUF231L1基因结构分析 | 第35-36页 |
| 3.2 GhDUF231L1基因组织表达分析 | 第36-37页 |
| 3.3 GhDUF231L1基因启动子的分析 | 第37-43页 |
| 3.3.1 proGhDUF231L1：：GUS载体构建和拟南芥的转化鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.2 GhDUF231L1基因启动子的表达模式分析 | 第38-40页 |
| 3.3.3 GhDUF231L1基因启动子截短实验 | 第40-43页 |
| 3.4 拟南芥tbl3突变体的鉴定和分析 | 第43-47页 |
| 3.4.1 tbl3突变体在gDNA和RNA水平的鉴定 | 第43-45页 |
| 3.4.2 tbl3突变体的表型分析 | 第45-46页 |
| 3.4.3 tbl3突变体的纤维素含量的分析 | 第46-47页 |
| 3.4.4 tbl3突变体的回补实验 | 第47页 |
| 3.5 GhDUF231L1亚细胞定位分析 | 第47-49页 |
| 3.5.1 GhDUF231L1-eGFP融合载体的构建和拟南芥转化 | 第47-48页 |
| 3.5.2 GhDUF231L1-eGFP融合蛋白的荧光定位 | 第48-49页 |
| 3.6 GhDUF231L1过量转基因拟南芥的分析 | 第49-52页 |
| 3.6.1 GhDUF231L1过量表达载体的构建 | 第49页 |
| 3.6.2 GhDUF231L1过量表达转基因拟南芥的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.6.3 GhDUF231L1过量表达转基因拟南芥纤维素含量的分析 | 第50-51页 |
| 3.6.4 GhDUF231L1过量表达转基因拟南芥细胞壁组分的分析 | 第51-52页 |
| 3.7 GhDUF231L1蛋白功能初探 | 第52-54页 |
| 3.7.1 GhDUF231L1过量表达转基因拟南芥全蛋白PME活性分析 | 第52-53页 |
| 3.7.2 GhDUF231L1蛋白表达载体的构建 | 第53页 |
| 3.7.3 GhDUF231L1蛋白的表达 | 第53-54页 |
| 3.8 GhDUF231L1的棉花转化 | 第54-56页 |
| 四、讨论 | 第56-59页 |
| 4.1 GhDUF231L1基因启动子分析 | 第56-57页 |
| 4.2 GhDUF231L1蛋白结构和功能预测 | 第57-58页 |
| 4.3 GhDUF231L1蛋白可能参与棉纤维细胞次生壁发育的调控 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
