| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第12-27页 |
| 第一章 流感病毒先天性免疫及NEDDYLATION通路研究进展 | 第12-27页 |
| 1.1 概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 人类中的季节性、大流行性和人畜共患流感病毒 | 第13-14页 |
| 1.1.2 禽流感对家禽业的影响 | 第14-15页 |
| 1.2 流感病毒与先天性免疫概述 | 第15-21页 |
| 1.2.1 流感病毒进入宿主细胞 | 第15-16页 |
| 1.2.2 流感病毒感染激活细胞内先天性免疫 | 第16-18页 |
| 1.2.3 抗病毒分子参与先天免疫对抗IAV感染 | 第18-20页 |
| 1.2.4 细胞参与先天免疫对抗IAV感染 | 第20-21页 |
| 1.3 NEDD8介导的翻译后修饰 | 第21-26页 |
| 1.3.1 概述 | 第21-22页 |
| 1.3.2 NEDD活化酶(E1) | 第22-23页 |
| 1.3.3 NEDD8结合酶(E2) | 第23-24页 |
| 1.3.4 Neddylation底物：Cullins | 第24-25页 |
| 1.3.5 CRL活性调节 | 第25-26页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 试验研究 | 第27-50页 |
| 第二章 类泛素化活化酶NAE对流感病毒增殖的影响 | 第27-38页 |
| 2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 病毒和鸡胚 | 第27页 |
| 2.1.2 细胞与细胞培养耗材 | 第27页 |
| 2.1.3 质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.4 抗体 | 第28页 |
| 2.1.5 其它试剂及耗材 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 NAE1、UBA3Knock-down细胞系的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.2 PR8流感病毒感染KD细胞系 | 第29-30页 |
| 2.2.3 病毒滴度测定 | 第30页 |
| 2.2.4 免疫印迹试验 | 第30页 |
| 2.2.5 RNA提取及反转录 | 第30-31页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第31-32页 |
| 2.3 结果 | 第32-36页 |
| 2.3.1 NAE1、UBA3-Knockdown细胞系的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.2 Westernblot检测流感病毒在KD细胞系中的增殖 | 第33-34页 |
| 2.3.3 细胞上清病毒TCID50测定结果 | 第34-35页 |
| 2.3.4 实时荧光定量PCR检测细胞中流感M1蛋白表达量 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 类泛素化蛋白NEDD8单克隆抗体制备 | 第38-50页 |
| 3.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 细胞和实验动物 | 第38页 |
| 3.1.2 载体与主要试剂 | 第38-39页 |
| 3.2 方法 | 第39-44页 |
| 3.2.1 NEDD8PCR扩增 | 第39页 |
| 3.2.2 重组原核表达载体及真核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.3 NEDD8蛋白原核表达及鉴定 | 第40页 |
| 3.2.4 小鼠免疫 | 第40-41页 |
| 3.2.5 间接ELISA方法的建立 | 第41页 |
| 3.2.6 饲养层细胞的制备 | 第41页 |
| 3.2.7 SP2/0细胞与脾细胞融合 | 第41-42页 |
| 3.2.8 杂交瘤细胞的筛选与亚克隆 | 第42页 |
| 3.2.9 腹水的制备 | 第42页 |
| 3.2.10 单抗效价检测 | 第42页 |
| 3.2.11 SDS-PAGE和免疫印迹(Westernblot)鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.11 单克隆抗体亚类鉴定 | 第43页 |
| 3.2.12 免疫共沉淀(co-IP) | 第43页 |
| 3.2.13 NEDD8抗原表位鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3 结果 | 第44-48页 |
| 3.3.1 原核重组质粒pET30-NEDD8鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.2 重组蛋白的表达和纯化结果 | 第45页 |
| 3.3.3 间接ELISA方法建立 | 第45页 |
| 3.3.4 单抗制备 | 第45-46页 |
| 3.3.5 WB检测 | 第46页 |
| 3.3.6 单克隆抗体的ELISA效价检测结果 | 第46-47页 |
| 3.3.8 NEDD8抗原表位鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-49页 |
| 3.5 小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
