| 摘要 | 第3-4页 |
| Summary | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第6-11页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 玉米生产现状 | 第11-12页 |
| 2 叶绿体转运肽及其作用机制 | 第12-13页 |
| 3 草甘膦性质及作用机理 | 第13-16页 |
| 3.1 草甘膦性质 | 第13页 |
| 3.2 草甘膦作用机理 | 第13-15页 |
| 3.3 抗草甘膦转基因研究进展 | 第15-16页 |
| 3.3.1 国内外抗草甘膦转基因作物研究现状 | 第15页 |
| 3.3.2 抗草甘膦转基因玉米的研究进展 | 第15-16页 |
| 4 植酸酶概述 | 第16-19页 |
| 4.1 植酸及植酸酶 | 第16-17页 |
| 4.2 植酸酶的理化性质及作用机理 | 第17-18页 |
| 4.3 植酸酶基因工程的研究进展 | 第18-19页 |
| 4.3.1 国内外植酸酶基因工程研究现状 | 第18-19页 |
| 4.3.2 转植酸酶基因玉米的发展 | 第19页 |
| 5 复合性状转基因作物的发展与安全监管 | 第19-24页 |
| 5.1 复合性状转基因作物的研究发展 | 第19-21页 |
| 5.2 国际上对复合性状转基因作物的安全监管 | 第21-23页 |
| 5.3 中国复合性状转基因作物的管理现状与展望 | 第23-24页 |
| Ⅱ 研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| Ⅲ 研究技术路线 | 第25-26页 |
| Ⅳ 材料与方法 | 第26-43页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| 1.1 植物材料 | 第26页 |
| 1.2 菌种与质粒 | 第26页 |
| 1.3 试剂 | 第26页 |
| 1.4 仪器设备 | 第26-27页 |
| 1.5 培养基 | 第27页 |
| 2 试验方法 | 第27-43页 |
| 2.1 DH5α感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.2 DH5α感受态细胞的转化 | 第28-29页 |
| 2.3 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第29页 |
| 2.4 转运肽的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.5 PCR引物设计与合成 | 第30-31页 |
| 2.6 目的片段的克隆 | 第31-32页 |
| 2.7 植物表达载体的构建 | 第32-37页 |
| 2.7.1 NOS终止子插入载体pCEPSP | 第32-33页 |
| 2.7.2 根特异性GLU1P启动子插入载体pCE-N | 第33页 |
| 2.7.3 CEPSPS插入载体pCE-NG和MEPSPS插入载体pCE-NG | 第33-34页 |
| 2.7.4 组成型启动子Ubi插入载体pCE-NGC和pCE-NGM | 第34-35页 |
| 2.7.5 phyA2基因连入载体pCE-NGC2和pCE-NGM | 第35-37页 |
| 2.8 表达载体pCE-NGC3和pCE-NGM3转化农杆菌 | 第37-39页 |
| 2.8.1 农杆菌EHA105感受态的制备 | 第37页 |
| 2.8.2 双价植物表达载体转化农杆菌 EHA105 | 第37-38页 |
| 2.8.3 农杆菌质粒的提取 | 第38页 |
| 2.8.4 双价植物表达载体转化农杆菌EHA105鉴定 | 第38-39页 |
| 2.9 遗传转化 | 第39-40页 |
| 2.9.1 农杆菌介导的玉米遗传转化及鉴定 | 第39页 |
| 2.9.2 玉米转基因再生植株的DNA小量提取与PCR初步检测 | 第39-40页 |
| 2.10 EPSPs基因在转基因植株叶片中的表达水平 | 第40-41页 |
| 2.10.1 RNA的提取(Trizol法) | 第40-41页 |
| 2.10.2 RNA反转录cDNA | 第41页 |
| 2.10.3 EPSPs基因的表达水平检测 | 第41页 |
| 2.11 转基因植株对高浓度草甘膦的反应 | 第41页 |
| 2.12 植酸酶活性测定 | 第41-43页 |
| 2.12.1 磷标准曲线的绘制 | 第41-42页 |
| 2.12.2 植酸酶的提取 | 第42页 |
| 2.12.3 植酸酶活性的测定 | 第42-43页 |
| Ⅴ 结果与分析 | 第43-60页 |
| 1 叶绿体转运肽生物学分析结果 | 第43页 |
| 2 目的基因的克隆 | 第43-51页 |
| 2.1 CC基因的亚克隆 | 第43-44页 |
| 2.2 EPSPS基因的亚克隆 | 第44-45页 |
| 2.3 CM基因的亚克隆 | 第45页 |
| 2.4 CEPSPS基因的亚克隆 | 第45-46页 |
| 2.5 MEPSPS基因的亚克隆 | 第46-47页 |
| 2.6 组成型启动子Ubiquitin的亚克隆 | 第47-48页 |
| 2.7 根部特异性启动子GLU1P的亚克隆 | 第48-49页 |
| 2.8 NOS终止子的亚克隆 | 第49-50页 |
| 2.9 植酸酶phyA2的亚克隆 | 第50-51页 |
| 3 植物表达载体pCE-NGC3和pCE-NGM3的构建及检测 | 第51-56页 |
| 3.1 pCE-N载体的构建 | 第51页 |
| 3.2 pCE-NG载体的构建 | 第51-52页 |
| 3.3 pCE-NGC和pCE-NGM载体的构建 | 第52-53页 |
| 3.4 pCE-NGC2和pCE-NGM2载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.5 pCE-NGC3和pCE-NGM3载体的构建 | 第54-55页 |
| 3.6 表达载体pCE-NGC3和pCE-NGM3转化农杆菌及其鉴定 | 第55-56页 |
| 4 转化再生苗的获得及检测 | 第56-57页 |
| 5 EPSPs基因在转基因植株叶片中的表达水平 | 第57-58页 |
| 6 草甘膦抗性的比较结果 | 第58页 |
| 7 转基因植株根系植酸酶基因表达及活性分析 | 第58-60页 |
| Ⅵ 讨论 | 第60-62页 |
| Ⅶ 结论 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 导师简介 | 第95-96页 |
| 作者简介 | 第96-97页 |
