首页--农业科学论文--林业论文--森林树种论文--特用阔叶树类论文--橡胶树论文

巴西橡胶树HbCDPK1基因的克隆与功能分析

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
1. 文献综述第13-25页
    引言第13页
    1.1 植物的信号转导第13-15页
        1.1.1 植物细胞信号转导系统与环境胁迫第14页
        1.1.2 Ca~(2+)与蛋白质磷酸化/去磷酸化第14-15页
    1.2 植物Ca_(2+)相关蛋白激酶第15-23页
        1.2.1 植物Ca_(2+)蛋白激酶的分类、结构及其功能第15-16页
        1.2.2 植物钙依赖蛋白激酶CDPK的结构和功能第16-23页
            1.2.2.1 植物钙依赖蛋白激酶CDPK的结构第16-17页
            1.2.2.2 植物钙依赖蛋白激酶CDPK的功能第17-23页
                1.2.2.2.1 参与植物的生长发育第18-19页
                1.2.2.2.2 参与植物的碳、氮代谢第19-20页
                1.2.2.2.3 参与各种植物激素的信号转导第20页
                1.2.2.2.4 参与离子转运和气孔运动第20-21页
                1.2.2.2.5 对非生物逆境胁迫信号转导的调控第21-22页
                1.2.2.2.6 参与植物病害反应信号转导的调控第22-23页
    1.3 本研究的目的和意义第23-24页
    1.4 本研究技术路线第24-25页
2. 材料与方法第25-54页
    2.1 材料与试剂第25-26页
        2.1.1 植物材料第25页
        2.1.2 菌株及质粒载体第25页
            2.1.2.1 菌种第25页
            2.1.2.2 载体第25页
        2.1.3 生化试剂第25页
        2.1.4 常用培养基的配制第25-26页
    2.2 方法与步骤第26-54页
        2.2.1 橡胶树不同组织中总RNA的提取第26-28页
            2.2.1.1 准备工作第26页
            2.2.1.2 橡胶树胶乳Total RNA的提取第26-27页
            2.2.1.3 橡胶树树皮、树根、叶片Total RNA的提取第27-28页
            2.2.1.4 RNA电泳检测第28页
        2.2.2 cDNA的合成第28-30页
            2.2.2.1 5'-RACE-Ready cDNA的合成第29页
            2.2.2.2 3'-RACE-Ready cDNA的合成第29-30页
        2.2.3 5'RACE、3'RACE分别扩增HbCDPK1的5'端、3'端第30-36页
            2.2.3.1 HbCDPK1的5'端的PCR扩增第30-31页
            2.2.3.2 HbCDPK1的3'端的PCR扩增第31页
            2.2.3.3 PCR产物的回收第31-32页
            2.2.3.4 PCR目的片段的克隆及其重组子筛选第32-36页
                2.2.3.4.1 连接反应第32页
                2.2.3.4.2 CaCl_2法制备大肠杆菌Ecoli DH5α感受态细胞第32-33页
                2.2.3.4.3 感受态鉴定第33页
                2.2.3.4.4 转化第33-34页
                2.2.3.4.5 菌液PCR重组子的鉴定第34-35页
                2.2.3.4.6 质粒DNA的提取第35-36页
                2.2.3.4.7 重组子的酶切鉴定第36页
                2.2.3.4.8 重组子菌种的保存第36页
        2.2.4 HbCDPK1全长cDNA的PCR扩增第36-38页
            2.2.4.1 测序与全长序列拼接第36页
            2.2.4.2 引物设计第36-37页
            2.2.4.3 PCR扩增第37-38页
            2.2.4.4 PCR产物的回收第38页
            2.2.4.5 PCR目的片段的克隆及重组子的筛选第38页
        2.2.5 HbCDPK1启动子区域的扩增第38-41页
            2.2.5.1 叶片基因组DNA的提取第38-39页
            2.2.5.2 引物设计第39页
            2.2.5.3 叶片基因组DNA酶切第39页
            2.2.5.4 酶切基因组DNA的纯化第39-40页
            2.2.5.5 基因组DNA与GenomeWalker接头的连接第40页
            2.2.5.6 第一轮PCR扩增第40页
            2.2.5.7 第二轮PCR扩增第40-41页
            2.2.5.8 PCR产物的回收第41页
            2.2.5.9 目的片段的克隆及其重组子筛选第41页
        2.2.6 HbCDPK1的RT-PCR表达分析第41-44页
            2.2.6.1 材料的处理第41页
            2.2.6.2 处理材料RNA的提取第41页
            2.2.6.3 cDNA的合成第41-42页
            2.2.6.4 模板量的确定第42页
            2.2.6.5 指数增长期的确定第42-43页
                2.2.6.5.1 18S rRNA基因指数增长期的确定第42-43页
                2.2.6.5.2 HbCDPK1基因指数增长期的确定第43页
            2.2.6.6 RT-PCR分析第43-44页
        2.2.7 HbCDPK1基因的原核表达第44-46页
            2.2.7.1 表达载体的构建与鉴定第44-45页
                2.2.7.1.1 HbCDPK1基因的酶切第44页
                2.2.7.1.2 原核表达载体pET-30a(+)的酶切第44页
                2.2.7.1.3 目的片段与表达载体的连接第44-45页
                2.2.7.1.4 重组子的筛选鉴定第45页
            2.2.7.2 程菌的表达第45-46页
            2.2.7.3 重组蛋白的SDS-PAGE分析第46页
        2.2.8 重组蛋白的纯化与分析第46-49页
            2.2.8.1 重组蛋白的纯化第46-47页
            2.2.8.2 重组蛋白酶活性的分析第47-48页
            2.2.8.3 重组蛋白的凝胶迁移率变动分析第48-49页
        2.2.9 根癌农杆菌介导转化烟草第49-54页
            2.2.9.1 表达载体的构建与鉴定第49-51页
                2.2.9.1.1 HbCDPK1基因的酶切第49-50页
                2.2.9.1.2 植物表达载体pCAMBIA1304的酶切第50页
                2.2.9.1.3 目的片段与表达载体的连接第50页
                2.2.9.1.4 重组子的筛选鉴定第50-51页
            2.2.9.2 CaCl_2法制备根癌农杆菌感受态细胞第51页
            2.2.9.3 重组表达载体pCAMBIA1304-EUCDPK1液氮冻融法转化农杆菌感受态细胞第51页
            2.2.9.4 阳性农杆菌菌株的鉴定第51页
            2.2.9.5 工程菌的准备第51-52页
            2.2.9.6 转化受体的获取第52页
            2.2.9.7 侵染及移栽第52页
            2.2.9.8 共转化植株的检测第52-54页
                2.2.9.8.1 烟草基因组DNA的提取第52页
                2.2.9.8.2 共转化植株的PCR检测第52-53页
                2.2.9.8.3 转基因植株的荧光检测第53-54页
3. 结果与分析第54-80页
    3.1 总RNA的提取与分析第54页
    3.2 HbCDPK1基因的克隆第54-59页
        3.2.1 5'RACE扩增HbCDPK1的5’端第54-55页
        3.2.2 3'RACE扩增HbCDPK1的3’端第55页
        3.2.3 HbCDPK1全长基因的克隆第55-59页
    3.3 HbCDPK1基因启动子区域的扩增第59-63页
        3.3.1 构建GenomeWalker文库与GenomeWalker DNA步移第59-60页
        3.3.2 HbCDPK1基因5'调控区域的序列分析第60-63页
    3.4 HbCDPK1的生物信息学分析第63-70页
        3.4.1 HbCDPK1蛋白质的特征分析第63-65页
        3.4.2 HbCDPK1蛋白质疏水性、信号肽、二级结构、跨膜区域的预测第65-68页
            3.4.2.1 HbCDPK1蛋白质疏水性与信号肽的预测第65-67页
            3.4.2.2 HbCDPK1蛋白质二级结构、跨膜区域的预测第67-68页
        3.4.3 HbCDPK1的系统进化树分析第68-69页
        3.4.4 HbCDPK1的亚细胞定位和功能预测第69-70页
    3.5 HbCDPK1的RT-PCR分析第70-72页
        3.5.1 HbCDPK1的组织特异性表达分析第70-71页
        3.5.2 不同处理(诱导、胁迫)对HbCDPK1的表达影响第71-72页
    3.6 HbCDPK1的原核表达第72-77页
        3.6.1 原核表达载体的构建第72-73页
        3.6.2 HbCDPK1的原核表达第73-75页
            3.6.2.1 HbCDPK1(全长序列)的表达第73-74页
            3.6.2.2 HbCDPK1(缺失序列)的表达第74-75页
        3.6.3 pET-30a-EHbCDPK1重组蛋白酶活性的测定第75-76页
        3.6.4 pET-30a-EHbCDPK1与pET-30a-ECDPK1重组蛋白的凝胶迁移率变动分析第76-77页
    3.7 根癌农杆菌介导的HbCDPK1转化烟草第77-80页
        3.7.1 构建植物表达载体第77页
        3.7.2 烟草的转化第77-78页
        3.7.3 转基因阳性植株的鉴定第78-79页
        3.7.4 绿色荧光蛋白(GFP)的检测第79-80页
4. 讨论第80-83页
    4.1 关于胶乳的采集方法第80页
    4.2 关于HbCDPK1的功能第80-82页
    4.3 关于HbCDPK1基因5'端调控序列第82-83页
5. 结果与结论第83-85页
    5.1 研究结果第83页
    5.2 结论第83-85页
参考文献第85-94页
缩略词表第94-95页
致谢第95页

论文共95页,点击 下载论文
上一篇:基于绿量的武汉市城市绿地对热岛效应的影响研究
下一篇:小麦抗条锈病基因Yr26的分子标记开发