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猪miR-124调控Cav1基因表达及miR-124在乙脑病毒感染中作用的研究

中文摘要第8-10页
ABSTRACT第10-11页
缩略词表第12-14页
1 前言第14-31页
    1.1 研究问题的由来第14页
    1.2 文献综述第14-30页
        1.2.1 猪抗病候选基因研究进展第14-18页
        1.2.2 Cav1基因研究进展第18-24页
        1.2.3 microRNA的基本特征与功能第24-26页
        1.2.4 靶向Cav1基因的miRNA的研究进展与不足第26页
        1.2.5 miRNA的抗病毒研究与不足第26-27页
        1.2.6 胞吞介导的病毒入胞机制第27-29页
        1.2.7 乙脑病毒的特性、危害及侵入细胞的途径第29-30页
    1.3 本研究的目的与意义第30-31页
2 材料与方法第31-50页
    2.1 材料第31-37页
        2.1.1 样品、细胞和病毒第31页
        2.1.2 载体和菌株第31-33页
        2.1.3 试剂、药品和试剂盒第33-36页
        2.1.4 主要仪器设备第36页
        2.1.5 主要分子生物学软件、网站和数据库第36-37页
    2.2 方法第37-50页
        2.2.1 本研究的技术路线第37页
        2.2.2 细胞培养第37-38页
        2.2.3 靶向猪Cav1基因的miRNA预测第38页
        2.2.4 双荧光素酶报告基因实验第38-42页
        2.2.5 基因的定量表达分析第42-44页
        2.2.6 蛋白质印迹(Western blot)第44-46页
        2.2.7 Caveolae的电镜观察第46-48页
        2.2.8 病毒感染和滴度测定第48页
        2.2.9 免疫荧光染色第48-49页
        2.2.10 流式细胞仪检测JEV感染的阳性细胞第49-50页
3 结果第50-69页
    3.1 靶向猪Cav1基因的miRNA的预测与鉴定第50-56页
        3.1.1 靶向猪Cav1基因的miRNA的预测第50页
        3.1.2 双荧光素酶报告基因结果第50-52页
        3.1.3 mRNA水平检测结果第52-54页
        3.1.4 蛋白水平检测结果第54-55页
        3.1.5 猪Cav1基因和miR-124的组织表达谱第55-56页
    3.2 超表达miR-124对caveolae数量的影响第56-58页
        3.2.1 PK15细胞中caveolin-1亚细胞定位第56-57页
        3.2.2 超表达miR-124降低caveolae的密度第57-58页
    3.3 超表达miR-124对乙脑病毒增殖的影响第58-69页
        3.3.1 PK15细胞感染乙脑病毒后Cav1基因和miR-124表达变化第58-60页
        3.3.2 超表达miR-124对乙脑病毒增殖的作用第60-61页
        3.3.3 甲基-β-环糊精(MβCD)对乙脑病毒增殖的影响第61-63页
        3.3.4 敲低Cav1基因表达对乙脑病毒增殖的影响第63-65页
        3.3.5 金雀异黄素(Genistein)对乙脑病毒增殖的影响第65-67页
        3.3.6 敲低Clathrin heavy chain基因表达对乙脑病毒增殖的影响第67-69页
4 讨论第69-78页
    4.1 关于microRNA对Cav1基因调控第69-71页
        4.1.1 关于靶向Cav1基因的miRNA的预测与验证第69-70页
        4.1.2 关于miR-124对Cav1基因的调控作用第70-71页
    4.2 关于caveolae结构的电镜观察第71-74页
        4.2.1 关于透射电镜样品的制作第71-72页
        4.2.2 关于细胞膜caveolae密度的统计方法第72-73页
        4.2.3 关于miR-124对细胞膜caveolae密度的影响第73-74页
    4.3 关于miR-124对乙脑病毒增殖的影响第74-78页
        4.3.1 关于研究病毒通过caveolae胞吞途径进入细胞的方法第74-75页
        4.3.2 关于乙脑病毒进入细胞的胞吞途径第75-76页
        4.3.3 关于miR-124抑制乙脑病毒增殖的机制第76-78页
5 小结第78-80页
    5.1 主要研究结果与结论第78页
    5.2 本研究的创新点与特色第78-79页
    5.3 本研究的不足之处与值得进一步研究的问题第79-80页
参考文献第80-98页
在读期间其他工作第98-101页
攻读学位期间撰写论文题录第101-102页
致谢第102-103页

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