| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-40页 |
| 1.1 油菜雄性不育与杂种优势利用 | 第14-15页 |
| 1.1.1 细胞质雄性不育 | 第14-15页 |
| 1.1.2 细胞核雄性不育 | 第15页 |
| 1.2 植物花药结构和发育研究 | 第15-22页 |
| 1.2.1 植物花药结构和发育时期 | 第15-18页 |
| 1.2.2 绒毡层在小孢子发育中的功能 | 第18-22页 |
| 1.3 芸薹科物种进化研究 | 第22-29页 |
| 1.3.1 芸薹属物种与拟南芥基因组比较研究 | 第22-27页 |
| 1.3.2 芸薹属物种间比较研究 | 第27-28页 |
| 1.3.3 A,C基因组的进化差异 | 第28-29页 |
| 1.4 甘蓝型油菜中图位克隆的应用 | 第29-33页 |
| 1.4.1 群体构建 | 第29-30页 |
| 1.4.2 与目标基因连锁的分子标记的开发 | 第30-32页 |
| 1.4.3 染色体登陆 | 第32-33页 |
| 1.5 甘蓝型油菜隐性上位互作细胞核雄性不育系的研究进展 | 第33-36页 |
| 1.5.1 隐性上位互作核不育系的遗传模式 | 第33-34页 |
| 1.5.2 7365A和9012A相关基因的定位和克隆 | 第34-35页 |
| 1.5.3 7365A和9012A的不育机理研究 | 第35-36页 |
| 1.6 叶绿体蛋白转运 | 第36-39页 |
| 1.6.1 叶绿体蛋白转运复合体 | 第36-39页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第39-40页 |
| 2 实验材料和方法 | 第40-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第40页 |
| 2.2 BnMs3的图位克隆 | 第40-43页 |
| 2.2.1 IP(Intron polymorphism)标记的筛选 | 第40-41页 |
| 2.2.2 定位群体的扫描 | 第41-42页 |
| 2.2.3 BAC文库的筛选和序列分析 | 第42-43页 |
| 2.2.4 候选基因预测 | 第43页 |
| 2.2.5 候选基因的比较分析 | 第43页 |
| 2.3 遗传转化载体的构建 | 第43-47页 |
| 2.3.1 互补测验载体构建 | 第43-45页 |
| 2.3.2 启动子分析载体构建 | 第45-46页 |
| 2.3.3 亚细胞定位载体构建 | 第46-47页 |
| 2.4 油菜和拟南芥的遗传转化 | 第47-48页 |
| 2.4.1 转基因苗的PCR鉴定 | 第47页 |
| 2.4.2 7365A育性恢复鉴定 | 第47页 |
| 2.4.3 油菜转基因苗的共分离检测 | 第47-48页 |
| 2.5 BnaC9.Tic40序列分析 | 第48页 |
| 2.6 7365A花药的表型观察 | 第48-50页 |
| 2.6.1 透射电镜 | 第48页 |
| 2.6.2 扫描电镜 | 第48-49页 |
| 2.6.3 绒毡层的PCD观察 | 第49-50页 |
| 2.6.4 花药脂染色处理 | 第50页 |
| 2.7 亚细胞定位实验 | 第50页 |
| 2.8 基因的表达分析 | 第50-52页 |
| 2.8.1 半定量PCR | 第50-51页 |
| 2.8.2 BnaC9.Tic40的RNA原位杂交 | 第51-52页 |
| 2.8.3 GUS染色分析 | 第52页 |
| 2.9 芸薹科中Tic40进化和功能分析 | 第52-57页 |
| 2.9.1 检测芸薹属基本种白菜、甘蓝、黑芥中Tic40拷贝数 | 第52-53页 |
| 2.9.2 芸薹科全基因组测序物种中Tic40基因组区域的分析 | 第53-54页 |
| 2.9.3 Tic40的结构和功能分析 | 第54页 |
| 2.9.4 甘蓝型油菜7365B中同源Tic40基因的表达分析 | 第54-55页 |
| 2.9.5 确定BolC9.Tic40中功能变异位点 | 第55页 |
| 2.9.6 扩增芸薹属、萝卜属、荠菜属和大蒜芥属中Tic40序列 | 第55页 |
| 2.9.7 Tic40序列分析 | 第55-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-117页 |
| 3.1 7365A花药的细胞学观察 | 第57-65页 |
| 3.1.1 7365A花药的透射电镜分析 | 第57-61页 |
| 3.1.2 7365A花药的扫描电镜分析 | 第61-62页 |
| 3.1.3 7365A绒毡层质体脂质合成受阻 | 第62-63页 |
| 3.1.4 7365A花药的PCD延迟 | 第63-65页 |
| 3.2 7365A育性恢复基因的精细定位 | 第65-72页 |
| 3.2.1 IP标记的开发 | 第65-68页 |
| 3.2.2 BnMs3的图谱定位 | 第68-69页 |
| 3.2.3 BAC重叠群的构建 | 第69-72页 |
| 3.3 BnMs3的克隆 | 第72-78页 |
| 3.3.1 候选基因的预测 | 第72-73页 |
| 3.3.2 候选基因的比较测序 | 第73-74页 |
| 3.3.3 BnMs3功能验证遗传转化载体构建 | 第74-76页 |
| 3.3.4 遗传转化实验 | 第76-78页 |
| 3.4 Bnac9.tic40的序列分析 | 第78-79页 |
| 3.5 BnaC9.Tic40的亚细胞定位 | 第79-80页 |
| 3.6 BnaC9.Tic40的表达模式 | 第80-85页 |
| 3.6.1 RT-PCR | 第81页 |
| 3.6.2 启动子分析 | 第81-83页 |
| 3.6.3 BnaC9.Tic40的原位杂交 | 第83-85页 |
| 3.7 BnaC9.Tic40(BnMs3)与bnac9.tic40(Bnms3)的比较 | 第85-87页 |
| 3.7.1 BnaC9.Tic40与bnac9.tic40在油菜花药中表达模式比较 | 第85-86页 |
| 3.7.3 BnaC9.Tic40与bnac9.tic40的亚细胞定位比较 | 第86页 |
| 3.7.4 BnaC9.Tic40与bnac9.tic40的蛋白序列比较 | 第86-87页 |
| 3.8 7365A与拟南芥tic40突变体表型比较 | 第87-89页 |
| 3.9 芸薹科Tic40基因进化分析 | 第89-114页 |
| 3.9.1 芸薹属基本种Tic40位点的分离 | 第89-92页 |
| 3.9.2 芸薹科中Tic40位点的保守性分析 | 第92-98页 |
| 3.9.3 Tic40的功能分析 | 第98-100页 |
| 3.9.4 甘蓝型油菜Tic40的表达分析 | 第100-101页 |
| 3.9.5 Tic40的序列进化关系 | 第101-104页 |
| 3.9.6 BnaC9.Tic40和bnac9.tic40的来源 | 第104-106页 |
| 3.9.7 BolC9.Tic40的功能变异位点 | 第106-110页 |
| 3.9.8 芸薹科不同物种中Tic40序列分析 | 第110-112页 |
| 3.9.9 Tic40的正向选择 | 第112-114页 |
| 3.10 基于BnaC9.Tic40中突变位点的功能标记开发 | 第114-115页 |
| 3.11 小结 | 第115-117页 |
| 4 讨论 | 第117-126页 |
| 4.1 甘蓝型油菜中图位克隆的策略 | 第117-119页 |
| 4.1.1 构建多个遗传背景差异较大的作图群体 | 第117-118页 |
| 4.1.2 拟南芥和芸薹属基因组共线性的应用和内含子多态性标记的开发 | 第118页 |
| 4.1.3 BAC重叠群的构建,排除同源克隆的干扰 | 第118-119页 |
| 4.2 BnaC9.Tic40影响花药绒毡层功能和小孢子发育 | 第119-120页 |
| 4.3 BnaC9.Tic40可能影响绒毡层质体中与脂类合成相关的蛋白的转运 | 第120-121页 |
| 4.4 芸薹科Tic40基因组区域在进化中的保守性 | 第121-122页 |
| 4.5 染色体重排造成等位基因和表型多态性效应 | 第122-123页 |
| 4.6 TPR和Hop结构域中的位点变异导致BnaC9.Tic40与bnac9.tic40的功能差异 | 第123-124页 |
| 4.7 在BolC9.Tic40进化分枝上的正向选择导致Tic40功能分化 | 第124页 |
| 4.8 BnaC9.7.Tic40和BnRf协同进化模式探讨 | 第124-125页 |
| 4.9 BnaC9.Tic40功能标记的应用 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
| 附录1：Tic40进化分析所使用的栽培种和野生种材料 | 第144-147页 |
| 附录2：本文所用的引物 | 第147-151页 |
| 附录3：用于检测部分同源染色体重组的BolC9.Tic40和BraA10.Tic40侧翼基因信息 | 第151-152页 |
| 附录4：作者简介及研究生阶段发表的文章 | 第152-153页 |
