| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-22页 |
| 1. 克氏原螯虾简介 | 第15-18页 |
| 2. 高通量测序在虾蟹类转录组中的应用 | 第18-20页 |
| 3. 虾蟹类性腺发育相关基因研究 | 第20-21页 |
| 4. 本研究的目的、方法和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 克氏原螯虾转录组高通量测序及分析 | 第22-36页 |
| 1. 材料与方法 | 第22-26页 |
| 1.1 实验材料 | 第22页 |
| 1.2 所用仪器设备 | 第22页 |
| 1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 1.4 RNA的提取和检测 | 第23页 |
| 1.5 转录组文库的构建与测序 | 第23-25页 |
| 1.6 序列拼接 | 第25-26页 |
| 1.7 功能注释、基因分类和代谢通路分析 | 第26页 |
| 1.8 SSR和SNP查找和分析 | 第26页 |
| 2. 结果与讨论 | 第26-36页 |
| 2.1454 测序和序列拼接组装 | 第26-28页 |
| 2.2 转录组序列的功能注释 | 第28-29页 |
| 2.3 GO功能分类和KEGG代谢途径 | 第29-32页 |
| 2.4 性腺发育相关基因筛选 | 第32-35页 |
| 2.5 SSR和SNP标记的鉴定 | 第35-36页 |
| 第三章 克氏原螯虾EST-SSR分布特征及引物开发利用 | 第36-43页 |
| 1. 材料与方法 | 第36-38页 |
| 1.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 1.2 所用仪器设备 | 第37页 |
| 1.3 主要试剂 | 第37页 |
| 1.4 基因组DNA提取 | 第37页 |
| 1.5 EST-SSR引物的筛选 | 第37-38页 |
| 1.6 EST-SSR标记的多态性分析 | 第38页 |
| 2. 结果与分析 | 第38-41页 |
| 2.1 克氏原螯虾转录组EST-SSR特征分析 | 第38-39页 |
| 2.2 多态性引物的筛选 | 第39-40页 |
| 2.3 EST-SSR标记的多态性分析 | 第40-41页 |
| 3. 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 克氏原螯虾不同组织及发育时期内参基因稳定性评价 | 第43-56页 |
| 1. 材料和方法 | 第44-47页 |
| 1.1 实验材料 | 第44页 |
| 1.2 所用仪器设备 | 第44页 |
| 1.3 主要试剂 | 第44页 |
| 1.4 RNA提取及cDNA合成 | 第44-45页 |
| 1.5 内参基因筛选及引物设计 | 第45-46页 |
| 1.6 实时定量PCR | 第46页 |
| 1.7 数据分析 | 第46页 |
| 1.8 vg基因的表达特征 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-54页 |
| 2.1 引物扩增效率及特异性 | 第47-48页 |
| 2.2 内参基因表达稳定性评价 | 第48-52页 |
| 2.3 不同内参基因校正后的vg表达量 | 第52-54页 |
| 3. 讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 克氏原螯虾性腺发育相关基因的克隆与表达分析 | 第56-107页 |
| 第一节 克氏原螯虾pcna基因的克隆与表达分析 | 第57-78页 |
| 1. 材料和方法 | 第57-70页 |
| 1.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 1.2 所用仪器设备 | 第58页 |
| 1.3 主要试剂 | 第58页 |
| 1.4 克氏原螯虾pcna基因cDNA全长的克隆 | 第58-62页 |
| 1.5 生物信息学分析 | 第62-63页 |
| 1.6 克氏原螯虾pcna基因的表达分析 | 第63-64页 |
| 1.7 克氏原螯虾pcna基因的原核表达及抗体制备 | 第64-70页 |
| 2. 结果与分析 | 第70-76页 |
| 2.1 克氏原螯虾pcna基因结构分析 | 第70-72页 |
| 2.2 多序列比对与系统进化分析 | 第72-74页 |
| 2.3 克氏原螯虾pcna基因的表达特征 | 第74-75页 |
| 2.4 重组蛋白表达及检测 | 第75-76页 |
| 2.5 各组织总蛋白Western blot检测 | 第76页 |
| 3. 讨论 | 第76-78页 |
| 第二节 克氏原螯虾foxL2 基因的克隆与表达分析 | 第78-90页 |
| 1. 材料和方法 | 第78-82页 |
| 1.1 实验材料 | 第78-79页 |
| 1.2 所用仪器设备 | 第79页 |
| 1.3 主要试剂 | 第79页 |
| 1.4 克氏原螯虾foxL2 基因基因cDNA全长的克隆 | 第79-81页 |
| 1.5 生物信息学分析 | 第81-82页 |
| 1.6 克氏原螯虾foxL2 基因的表达分析 | 第82页 |
| 2. 结果与分析 | 第82-88页 |
| 2.1 克氏原螯虾foxL2 基因结构分析 | 第82-83页 |
| 2.2 多序列比对与系统进化分析 | 第83页 |
| 2.3 克氏原螯虾foxL2 基因的表达特征 | 第83-88页 |
| 3. 讨论 | 第88-90页 |
| 第三节 克氏原螯虾cyclinB基因和cdc2 基因的克隆与表达分析 | 第90-107页 |
| 1. 材料和方法 | 第90-95页 |
| 1.1 实验材料 | 第90-91页 |
| 1.2 所用仪器设备 | 第91页 |
| 1.3 主要试剂 | 第91页 |
| 1.4 克氏原螯虾cyclin B和cdc2 基因cDNA全长的克隆 | 第91-94页 |
| 1.5 生物信息学分析 | 第94页 |
| 1.6 克氏原螯虾cyclin B和cdc2 基因的表达分析 | 第94-95页 |
| 2. 结果与分析 | 第95-105页 |
| 2.1 克氏原螯虾cyclin B和cdc2 基因结构分析 | 第95-100页 |
| 2.2 多序列比对与系统进化分析 | 第100-104页 |
| 2.3 克氏原螯虾cyclin B和cdc2 基因的表达特征 | 第104-105页 |
| 3. 讨论 | 第105-107页 |
| 结论 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-121页 |
| 附录一 缩略词 | 第121-123页 |
| 附录二 实验仪器设备及产地 | 第123-124页 |
| 附录三 攻读博士学位期间发表论文 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
