| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 利用酮还原酶合成(R)2羟基4苯基丁酸乙酯 | 第11-12页 |
| 1.1.1 (R)2羟基4苯基丁酸乙酯合成 | 第11页 |
| 1.1.1.1 (R)2羟基4苯基丁酸乙酯用途 | 第11页 |
| 1.1.1.2 (R)2羟基4苯基丁酸乙酯合成 | 第11页 |
| 1.1.2 酮还原酶制备(R)2羟基4苯基丁酸乙酯研究 | 第11-12页 |
| 1.2 质粒的稳定性的研究 | 第12-14页 |
| 1.2.1 质粒稳定性的研究意义 | 第12-13页 |
| 1.2.2 提高质粒稳定性的方法 | 第13-14页 |
| 1.2.2.1 常规提高质粒稳定性的方法 | 第13页 |
| 1.2.2.2 质粒依赖系统 | 第13-14页 |
| 1.3 利用pMAK705温敏型质粒基因敲除原理 | 第14-16页 |
| 1.3.1 同源重组概论 | 第14-15页 |
| 1.3.2 pMAK705温敏型质粒基因敲除原理 | 第15-16页 |
| 1.3.2.1 温敏型质粒和自杀型质粒基因敲除原理比较 | 第15页 |
| 1.3.2.2 pMAK705质粒基因敲除原理 | 第15-16页 |
| 1.4 质粒依赖系统中敲除基因的选择 | 第16-17页 |
| 1.4.1 tpiA基因 | 第16页 |
| 1.4.2 glmS基因 | 第16-17页 |
| 1.5 研究内容 | 第17-19页 |
| 第2章 酮还原酶基因、葡萄糖脱氢酶基因的克隆和表达 | 第19-36页 |
| 2.1 本章试验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 本章所用菌种与质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 本章主要试剂与仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.3 培养基及试剂配置 | 第20-21页 |
| 2.1.4 本章所用引物 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 本章引物设计 | 第22页 |
| 2.2.2 扩增CgKR2基因、BmGDH基因 | 第22-23页 |
| 2.2.3 CgKR2、BmGDH基因TA克隆及测序分析 | 第23页 |
| 2.2.4 CgKR2基因、BmGDH基因修饰 | 第23页 |
| 2.2.5 CgKR2、BmGDH基因重叠延伸过程 | 第23-25页 |
| 2.2.6 CgKR2、BmGDH扩增产物与pET17b-TC质粒的连接 | 第25-26页 |
| 2.2.6.1 PCR产物与pET17b-TC质粒定向连接设计原理 | 第25-26页 |
| 2.2.6.2 实验步骤 | 第26页 |
| 2.2.7 重组质粒转入蛋白表达宿主大肠杆菌BL21(DE3) | 第26-27页 |
| 2.2.8 重组质粒的诱导表达和SDS-PAGE电泳分析 | 第27页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第27-36页 |
| 2.3.1 结果 | 第27-34页 |
| 2.3.2 讨论 | 第34-36页 |
| 第3章 tpiA、glmS基因的克隆和互补表达质粒的构建 | 第36-48页 |
| 3.1 本章实验材料与仪器 | 第36-37页 |
| 3.1.1 本章菌种与质粒 | 第36页 |
| 3.1.2 本章主要试剂与仪器 | 第36-37页 |
| 3.1.3 本章所用引物 | 第37页 |
| 3.2 试验方法 | 第37-41页 |
| 3.2.1 tpiA、glmS基因克隆 | 第39-40页 |
| 3.2.1.1 tpiA、glmS引物设计 | 第39页 |
| 3.2.1.2 tpiA、glmS基因PCR扩增 | 第39页 |
| 3.2.1.3 tpiA、glmS基因与pUCm-T质粒连接、转化 | 第39页 |
| 3.2.1.4 重组菌筛选鉴定、测序分析 | 第39-40页 |
| 3.2.2 互补表达质粒的构建过程 | 第40-41页 |
| 3.2.2.1 pET17b-TC质粒表达盒扩增 | 第40-41页 |
| 3.2.2.2 pET17b-TC质粒表达盒与pUCm-tpiA质粒酶切 | 第41页 |
| 3.2.2.3 两种酶切产物连接、转化并鉴定 | 第41页 |
| 3.2.2.4 生物信息学分析 | 第41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-48页 |
| 3.3.1 实验结果 | 第41-46页 |
| 3.3.2 讨论 | 第46-48页 |
| 第4章 tpiA、glmS基因敲除质粒构建 | 第48-57页 |
| 4.1 前言 | 第48页 |
| 4.2 本章材料与仪器 | 第48-50页 |
| 4.2.1 本章菌种与质粒 | 第48页 |
| 4.2.2 本章试剂与仪器 | 第48-49页 |
| 4.2.3 本章所用引物 | 第49-50页 |
| 4.3 试验方法 | 第50-53页 |
| 4.3.1 pMAK705敲除载体的构建 | 第50-53页 |
| 4.3.1.1 tpiA、glmS基因上下游同源区的扩增 | 第50-51页 |
| 4.3.1.2 tpiA、glmS基因上下游同源区拼接 | 第51-52页 |
| 4.3.1.3 tpiA、glmS基因重叠延伸产物与pMAK705连接、转化 | 第52-53页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第53-57页 |
| 4.4.1 结果 | 第53-56页 |
| 4.4.2 讨论 | 第56-57页 |
| 结语 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
