| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 主要符号表 | 第11-13页 |
| 文献综述 | 第13-18页 |
| 1 引言 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-29页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 载体、细胞株、菌株和病毒株 | 第19页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-29页 |
| 2.2.1 E0基因比对及合成 | 第20页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第20-21页 |
| 2.2.3 重组慢病毒载体构建 | 第21-24页 |
| 2.2.4 重组慢病毒载体转染HEK-293T细胞 | 第24页 |
| 2.2.5 重组慢病毒滴度测定 | 第24页 |
| 2.2.6 重组慢病毒感染MDBK细胞 | 第24-25页 |
| 2.2.7 Western blot鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.8 重组质粒标准品与拷贝数换算 | 第26页 |
| 2.2.9 反应条件优化 | 第26页 |
| 2.2.10 标准曲线的建立 | 第26-27页 |
| 2.2.11 特异性试验 | 第27页 |
| 2.2.12 灵敏性试验 | 第27页 |
| 2.2.13 重复性试验 | 第27页 |
| 2.2.14 统计学方法 | 第27-28页 |
| 2.2.15 传代稳定性研究 | 第28页 |
| 2.2.16 冻存稳定性研究 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-39页 |
| 3.1 分泌表达BVDV E0蛋白MDBK细胞系的建立 | 第29-34页 |
| 3.1.1 E0基因比对及合成 | 第29-30页 |
| 3.1.2 慢病毒重组质粒的构建及鉴定 | 第30-32页 |
| 3.1.3 三组慢病毒包装、浓缩及滴度测定 | 第32页 |
| 3.1.4 重组慢病毒感染MDBK细胞 | 第32-33页 |
| 3.1.5 Western blot检测BVDV E0蛋白表达 | 第33-34页 |
| 3.2 BVDV E0基因拷贝数定量检测方法的建立 | 第34-36页 |
| 3.2.1 反应体系优化 | 第34页 |
| 3.2.2 标准曲线的建立 | 第34-35页 |
| 3.2.3 特异性试验 | 第35页 |
| 3.2.4 灵敏性试验 | 第35-36页 |
| 3.2.5 重复性试验 | 第36页 |
| 3.3 分泌表达BVDV E0蛋白MDBK细胞系稳定性分析 | 第36-39页 |
| 3.3.1 传代稳定性研究 | 第36-38页 |
| 3.3.2 冻存稳定性研究 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-44页 |
| 4.1 目的片段的选择 | 第39页 |
| 4.2 慢病毒载体及其安全性 | 第39-40页 |
| 4.3 细胞和信号肽的选择 | 第40页 |
| 4.4 建立BVDV定量PCR检测方法的必要性 | 第40-41页 |
| 4.5 E0基因作为BVDV PCR检测方法通用引物的可行性 | 第41页 |
| 4.6 MDBK细胞稳定分泌表达的研究意义 | 第41-42页 |
| 4.7 提高外源基因表达率方法探究 | 第42-44页 |
| 5 总结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-54页 |
| 附录：各种培养液及溶液的配制 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57-58页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第58页 |
