| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| ·食肉动物细小病毒简介 | 第13-16页 |
| ·猫泛白细胞减少症病毒 | 第13-14页 |
| ·犬细小病毒 | 第14-15页 |
| ·水貂肠炎细小病毒 | 第15-16页 |
| ·食肉动物细小病毒特性 | 第16-19页 |
| ·分子生物学特性 | 第16页 |
| ·病毒的复制机制 | 第16-17页 |
| ·理化与增殖特性 | 第17-18页 |
| ·抗原特性 | 第18-19页 |
| ·病毒跨种间传播的特点 | 第19页 |
| ·水貂肠炎细小病毒研究进展 | 第19-25页 |
| ·水貂肠炎细小病毒简介 | 第19-20页 |
| ·水貂肠炎细小病毒病原学 | 第20页 |
| ·水貂肠炎细小病毒的分子生物学特性 | 第20-21页 |
| ·水貂肠炎细小病毒编码蛋白 | 第21-24页 |
| ·结构蛋白 | 第21-22页 |
| ·非结构蛋白 | 第22-24页 |
| ·水貂肠炎细小病毒致病机理 | 第24-25页 |
| ·水貂肠炎细小病毒的免疫预防 | 第25页 |
| ·本研究的背景与目的 | 第25-27页 |
| 第二章 水貂肠炎细小病毒NS1 蛋白基因序列分析及系统发育树的构建 | 第27-42页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·毒株 | 第27页 |
| ·主要仪器、试剂、菌株和载体 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·病料处理 | 第28页 |
| ·病毒基因组的提取 | 第28页 |
| ·引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| ·NS1 和VP2 全基因扩增 | 第29页 |
| ·扩增产物的克隆 | 第29页 |
| ·PCR 扩增片段与PMD18-T 载体连接 | 第29页 |
| ·连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第29页 |
| ·重组阳性质粒筛选 | 第29-30页 |
| ·NS1 基因遗传变异分析 | 第30页 |
| ·NS1 基因同源性分析 | 第30页 |
| ·NS1 蛋白磷酸化位点预测分析 | 第30页 |
| ·NS1 蛋白重要氨基酸差异位点对比分析 | 第30页 |
| ·NS1 全基因推导氨基酸序列系统发育树的构建 | 第30页 |
| ·VP2 基因遗传变异分析 | 第30-32页 |
| ·结果 | 第32-40页 |
| ·犬细小病毒、水貂肠炎细小病毒NS1 和VP2 全基因PCR 扩增结果 | 第32-33页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定结果 | 第33页 |
| ·FPLV、CPV 和MEV 不同病毒株NS1 基因以及氨基酸序列分析 | 第33-37页 |
| ·NS1 基因同源性分析 | 第33页 |
| ·NS1 蛋白磷酸化位点预测分析 | 第33-34页 |
| ·NS1 基因推导的氨基酸差异分析 | 第34-36页 |
| ·NS1 基因推到的氨基酸序列系统进化树分析 | 第36-37页 |
| ·FPLV、CPV 和MEV 不同病毒株VP2 基因及氨基酸序列分析 | 第37-40页 |
| ·VP2 基因同源性分析 | 第37页 |
| ·VP2 基因推导的氨基酸差异分析 | 第37页 |
| ·VP2 基因推导的氨基酸序列系统进化树分析 | 第37-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 Bac to Bac 系统表达与纯化MEV 非结构蛋白NS1 | 第42-56页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·病毒与细胞系 | 第42页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-50页 |
| ·水貂肠炎细小病毒MEVB 株DNA 的提取 | 第43页 |
| ·NS1 基因的扩增 | 第43-44页 |
| ·NS1 基因序列的克隆 | 第44页 |
| ·NS1 基因与PCR-Blunt 载体连接 | 第44页 |
| ·Blunt 载体连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第44页 |
| ·重组Blunt-NS1 质粒的鉴定 | 第44页 |
| ·NS1 蛋白真核表达穿梭载体的构建 | 第44-46页 |
| ·粘性末端NS1 基因的制备 | 第44-45页 |
| ·粘性末端pFastBacHTA 载体的制备 | 第45页 |
| ·粘性NS1 基因片段与pFastBac HTA 空载体连接 | 第45页 |
| ·连接产物的转化DH5α感受态细胞 | 第45-46页 |
| ·重组pFastbacHTA-NS1 鉴定 | 第46页 |
| ·PCR 鉴定 | 第46页 |
| ·pFastBacHTA-NS1 阳性质粒的单双酶切鉴定 | 第46页 |
| ·重组NS1 Bacmid 杆粒的构建 | 第46-47页 |
| ·重组穿梭载体转化 DH10Bac 感受态细胞 | 第46-47页 |
| ·重组NS1 Bacmid 杆粒的鉴定与提取 | 第47页 |
| ·重组NS1 蛋白在sf9 昆虫细胞中的表达 | 第47-49页 |
| ·重组NS1 杆粒转染sf9 昆虫细胞 | 第47-48页 |
| ·重组杆状病毒贮液的制备 | 第48页 |
| ·重组杆状病毒PCR 鉴定 | 第48页 |
| ·重组杆状病毒滴度检测 | 第48-49页 |
| ·重组NS1 蛋白（rNS1）表达与鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组NS1 蛋白（rNS1）表达 | 第49页 |
| ·重组NS1 蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定 | 第49页 |
| ·间接免疫荧光试验（IFA）鉴定 | 第49页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第49-50页 |
| ·结果 | 第50-54页 |
| ·NS1 全基因序列的扩增 | 第50页 |
| ·pFastBacHTA-NS1 重组质粒单双酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组NS1 Bacmid 杆粒PCR 鉴定 | 第51页 |
| ·细胞病变 | 第51-52页 |
| ·重组杆状病毒PCR 鉴定 | 第52页 |
| ·重组杆状病毒滴度测定 | 第52-53页 |
| ·重组NS1 蛋白表达分析 | 第53页 |
| ·间接免疫荧光试验鉴定分析 | 第53-54页 |
| ·重组 NS1 蛋白 western bolt 鉴定分析 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 重组非结构蛋白NS1 生物学特性分析 | 第56-63页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·病毒、细胞与实验动物 | 第56页 |
| ·主要试剂、仪器 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-58页 |
| ·重组NS1 蛋白等电点与构象分析 | 第56-57页 |
| ·重组NS1 蛋白细胞毒性分析 | 第57页 |
| ·细胞处理 | 第57页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第57页 |
| ·细胞毒性分析 | 第57页 |
| ·小鼠体内MEV 非结构蛋白抗体水平检测 | 第57-58页 |
| ·活病毒免疫小鼠体内MEV 抗体水平检测 | 第57页 |
| ·灭活病毒免疫小鼠体内MEV 抗体水平检测 | 第57-58页 |
| ·活病毒、灭活病毒免疫小鼠体内NS1 蛋白 IgG 抗体水平检测 | 第58页 |
| ·水貂血清样本NS1 蛋白抗体检测 | 第58页 |
| ·结果 | 第58-62页 |
| ·重组NS1 蛋白等电点预测 | 第58页 |
| ·重组NS1 蛋白构象预测 | 第58-59页 |
| ·重组NS1 蛋白细胞毒性鉴定 | 第59页 |
| ·MEV 活病毒免疫小鼠体内MEV 抗体检测 | 第59-60页 |
| ·MEV 灭活病毒免疫小鼠体内MEV 抗体检测 | 第60-61页 |
| ·MEV 活病毒免疫小鼠体内 NS1 蛋白抗体水平检测 | 第61页 |
| ·MEV 灭活病毒免疫小鼠后 NS1 蛋白抗体水平检测 | 第61-62页 |
| ·水貂血清样本 NS1 蛋白抗体检测 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 附录 | 第71-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简历 | 第75页 |
