| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 1 前言 | 第7-12页 |
| 1.1 大肠杆菌的冷激蛋白CspA及其家族成员 | 第8页 |
| 1.2 冷激蛋白的表达调控 | 第8-10页 |
| 1.2.1 5’-UTR 的作用 | 第8-9页 |
| 1.2.2 翻译水平的调控 | 第9-10页 |
| 1.3 冷激蛋白启动子的应用 | 第10-12页 |
| 2 材料和方法 | 第12-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第12页 |
| 2.2 试剂与药品 | 第12-13页 |
| 2.3 实验仪器 | 第13页 |
| 2.4 常用试剂配置 | 第13-14页 |
| 2.5 实验方法 | 第14-27页 |
| 2.5.1 质粒的构建 | 第16-24页 |
| 2.5.1.1 引物设计 | 第16-17页 |
| 2.5.1.2 PCR 扩增 cspA 启动子及其上下游序列 | 第17-18页 |
| 2.5.1.3 黑腹果蝇 cecropinB 全长 cDNA 的 PCR 扩增 | 第18-20页 |
| 2.5.1.4 酶切、连接与转化 | 第20-21页 |
| 2.5.1.5 重组子的酶切鉴定及测序 | 第21-22页 |
| 2.5.1.6 酶切连接，构建含有冷激启动子 cecropinB 载体 | 第22-24页 |
| 2.5.2 cecropinB 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第24页 |
| 2.5.3 SDS-PAGE | 第24-26页 |
| 2.5.4 菌液浓度（OD600）的测定 | 第26页 |
| 2.5.5 Western Blotting | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-41页 |
| 3.1 质粒的构建 | 第27-36页 |
| 3.1.1 目的片段的扩增 | 第27-30页 |
| 3.1.1.1 E.coli cspA 上游启动子序列的扩增 | 第27-29页 |
| 3.1.1.2 cecropinB 全长 cDNA 序列的 PCR 扩增 | 第29页 |
| 3.1.1.3 PCR 鉴定 PCR 产物与 T-vector 的连接结果 | 第29-30页 |
| 3.1.2 酶切鉴定连接方向 | 第30-31页 |
| 3.1.3 测序鉴定 | 第31-34页 |
| 3.1.3.1 cspA 基因启动子序列测序结果 | 第31页 |
| 3.1.3.2 黑腹果蝇 cecropinB cDNA 测序结果 | 第31-34页 |
| 3.1.4 酶切回收、连接与鉴定 | 第34-36页 |
| 3.1.4.1 酶切回收 | 第34-35页 |
| 3.1.4.2 重组子的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2 cecropinB 的诱导表达 | 第36-41页 |
| 3.2.1 宿主菌的生长曲线 | 第36-38页 |
| 3.2.2 SDS-PAGE 分析 | 第38-39页 |
| 3.2.3 RT-PCR 结果 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-47页 |
| 4.1 cecropinB 对 E. coli 的毒性作用 | 第41-42页 |
| 4.2 IPTG对E. coli的毒性作用 | 第42-43页 |
| 4.3 pMBC 系列载体比较分析 cspA 启动子区的调控表达机制 | 第43-44页 |
| 4.4 低温诱导表达载体的应用价值 | 第44-45页 |
| 4.5 问题及展望 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
