| 创新点 | 第12-13页 |
| 摘要 | 第13-15页 |
| ABSTRACT | 第15-16页 |
| 研究意义 | 第17-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-56页 |
| 第一章 禽双RNA病毒、甲型流感病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病毒简介 | 第18-42页 |
| 1 双链RNA病毒传染性法氏囊病病毒简介 | 第18-25页 |
| 1.1 禽传染性法氏囊病病毒分子生物学特性 | 第18页 |
| 1.2 BDV的基因组结构 | 第18-20页 |
| 1.3 IBDV的编码蛋白 | 第20-25页 |
| 2 单链RNA病毒甲型流感病毒简介 | 第25-32页 |
| 2.1 甲型流感病毒分子生物学特性 | 第25-26页 |
| 2.2 流感病毒基因组结构 | 第26页 |
| 2.3 流感病毒编码的蛋白及其功能 | 第26-32页 |
| 3 单链DNA病毒猪圆环病毒2型简介 | 第32-36页 |
| 3.1 PCV2分子生物学特性 | 第32页 |
| 3.2 PCV2基因组结构 | 第32-33页 |
| 3.3 PCV2编码蛋白及功能 | 第33-36页 |
| 4 双链DNA病毒伪狂犬病毒简介 | 第36-42页 |
| 4.1 伪狂犬病毒生物学特性 | 第36-37页 |
| 4.2 伪狂犬病毒基因组结构 | 第37-38页 |
| 4.3 伪狂犬病毒编码蛋白 | 第38-42页 |
| 第二章 3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1 | 第42-48页 |
| 1 AGC蛋白激酶家族 | 第42-44页 |
| 1.1 PKA | 第42-43页 |
| 1.2 PKB | 第43-44页 |
| 1.3 PKC | 第44页 |
| 2 PDK1 | 第44-48页 |
| 第三章 SUMO修饰参与抗病毒免疫信号转导 | 第48-56页 |
| 1. SUMO化修饰系统简介 | 第48-53页 |
| 2. SUMO修饰对抗病毒信号传导的调控 | 第53-56页 |
| 第二部分 研究内容 | 第56-122页 |
| 第一章 病毒感染对PDK1 SUMO化修饰的影响 | 第56-89页 |
| 1. 材料与方法 | 第57-71页 |
| 1.1 病毒与细胞 | 第57-58页 |
| 1.2 试剂与抗体 | 第58页 |
| 1.3 蛋白样品收集 | 第58-59页 |
| 1.4 免疫共沉淀试验 | 第59页 |
| 1.5 Pull Down试验 | 第59-60页 |
| 1.6 间接免疫荧光技术 | 第60页 |
| 1.7 丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺变形电泳SDS-PAGE及Western-blot | 第60-61页 |
| 1.8 Flag-PDK1真核表达载体的构建 | 第61-63页 |
| 1.9 VP2病毒样颗粒的制备 | 第63-66页 |
| 1.10 VP3的原核表达载体构建及蛋白的表达与纯化 | 第66页 |
| 1.11 IBDV感染DF-1细胞对PDK1磷酸化、AKT的磷酸化、S6K磷酸化以及PDK1修饰条带产生的影响 | 第66页 |
| 1.12 IBDV感染293T细胞对PDK1磷酸化、AKT的磷酸化、S6K磷酸化以及PDK1修饰条带产生的影响 | 第66-67页 |
| 1.13 IBDV感染SPF鸡对法氏囊组织中PDK1磷酸化、AKT的磷酸化、S6K磷酸化以及PDK1修饰条带产生的影响 | 第67页 |
| 1.14 H7N9感染293T细胞对PDK1磷酸化、AKT的磷酸化、S6K磷酸化以及PDK1修饰条带产生的影响 | 第67页 |
| 1.15 流感病毒H7N9亚型感染小鼠,对各器官中PDK1磷酸化、AKT的磷酸化、S6K磷酸化以及PDK1修饰条带产生的影响 | 第67-68页 |
| 1.16 过表达PDK1后,IBDV感染对PDK1磷酸化、AKT的磷酸化、S6K磷酸化以及PDK1修饰条带产生的影响 | 第68页 |
| 1.17 过表达PDK1后,流感病毒H7N9和PR8对PDK1磷酸化、AKT的磷酸化、S6K磷酸化以及PDK1修饰条带产生的影响 | 第68页 |
| 1.18 PCV2感染PK15细胞对PDK1磷酸化、AKT的磷酸化、S6K磷酸化以及PDK1修饰条带产生的影响 | 第68-69页 |
| 1.19 PRV感染PK15细胞对PDK1磷酸化、AKT的磷酸化、S6K磷酸化以及PDK1修饰条带产生的影响 | 第69页 |
| 1.20 IBDV结构蛋白VP3和VP2对PDK1修饰条带产生的影响 | 第69页 |
| 1.21 PDK1 SUMO化的鉴定 | 第69页 |
| 1.22 PDK1三点突变对其修饰条带产生的影响 | 第69-70页 |
| 1.23 VP3对PDK1及PDK1三点突变后AKT的磷酸化、S6K磷酸化以及PDK1修饰条带产生的影响 | 第70页 |
| 1.24 SUMO1、SUMO2、SUMO3分子对PDK1定位的影响(IFA) | 第70-71页 |
| 2. 实验结果 | 第71-87页 |
| 2.1 IBDV感染DF-1细胞对PDK1修饰条带的影响 | 第71-72页 |
| 2.2 IBDV感染293T细胞对PDK1修饰条带的影响 | 第72-73页 |
| 2.3 IBDV感染SPF鸡对法氏囊组织中PDK1修饰条带的影响 | 第73页 |
| 2.4 H7N9感染293T细胞对PDK1磷酸化、AKT的磷酸化、S6K磷酸化以及PDK1修饰条带产生的影响 | 第73-74页 |
| 2.5 流感病毒H7N9亚型感染小鼠,对各器官中PDK1修饰条带出现的影响 | 第74-75页 |
| 2.6 过表达PDK1后,IBDV感染对PDK1修饰条带产生以及AKT磷酸化的影响 | 第75-76页 |
| 2.7 过表达PDK1后,流感病毒H7N9和PR8对PDK1修饰条带产生的影响 | 第76-77页 |
| 2.8 PCV2感染PK15细胞对PDK1修饰条带的影响 | 第77-78页 |
| 2.9 PRV感染PK15细胞对PDK1修饰条带的影响 | 第78页 |
| 2.10 IBDV结构蛋白VP3和VP2对修饰条带产生的影响 | 第78-80页 |
| 2.11 PDK1 SUMO化的鉴定 | 第80页 |
| 2.12 PDK1 SUMO化修饰位点及互作位点的预测 | 第80-81页 |
| 2.13 PDK1的SUMO化修饰位点在不同种属间的进化分析 | 第81-82页 |
| 2.14 PDK1三点突变对其修饰条带产生的影响 | 第82-83页 |
| 2.15 VP3对PDK1及PDK1三点突变修饰条带产生的影响,以及对AKT、 S6K磷酸化水平的影响 | 第83-84页 |
| 2.16 SUMO1、SUMO2、SUMO3分子以及VP3对PDK1定位的影响(IFA) | 第84-87页 |
| 3. 讨论 | 第87-89页 |
| 第二章 VPS34对PDK1 SUMO化的调控作用 | 第89-106页 |
| 1. 材料与方法 | 第90-95页 |
| 1.1 病毒与细胞 | 第90页 |
| 1.2 试剂与抗体 | 第90页 |
| 1.3 银染:方法如下 | 第90-91页 |
| 1.4 VPS34与PDK1的互作 | 第91页 |
| 1.5 VPS34与PDK1的互作(Pull down) | 第91页 |
| 1.6 VP3对PDK1与VPS34相互作用的影响(IP) | 第91-92页 |
| 1.7 VP3对PDK1与VPS34定位的影响(IFA) | 第92页 |
| 1.8 VPS34过表达对PDK1的SUMO化影响(CoIP) | 第92页 |
| 1.9 过表达VPS34对PDK1与UBC9互作的影响 | 第92-93页 |
| 1.10 SUMO化修饰对VPS34与PDK1互作的影响 | 第93页 |
| 1.11 PDK1三点突变对PDK1与VPS34互作的影响 | 第93页 |
| 1.12 验证VP3与Flag-VPS34的相互作用(Pull Down) | 第93-94页 |
| 1.13 VP3以及截短体与VPS34的互作情况分析(Pull down) | 第94页 |
| 1.14 VP3截短对PDK1与VP534相互作用的影响 | 第94页 |
| 1.15 VP3对VPS34与PDK1定位的影响 | 第94-95页 |
| 1.16 VPS34真核表达载体的构建 | 第95页 |
| 2. 实验结果 | 第95-104页 |
| 2.1 PDK1和VPS34互作 | 第95-96页 |
| 2.2 VP3对PDK1-VPS34复合体的影响 | 第96-98页 |
| 2.3 VPS34过表达对PDK1的SUMO化影响(CoIP) | 第98-99页 |
| 2.4 过表达VPS34对PDKI与UBC9互作的影响 | 第99页 |
| 2.5 SUMO化修饰对VPS34与PDK1互作的影响 | 第99-100页 |
| 2.6 PDK1三点突变对PDK1与VPS34互作的影响 | 第100-101页 |
| 2.7 验证VP3与Flag-VPS34的相互作用(Pull Down) | 第101页 |
| 2.8 精细定位VP3与VPS34的互作位点 | 第101-102页 |
| 2.9 VP3及其截短体对VPS34与PDK1互作的影响(CoIP) | 第102-103页 |
| 2.10 VP3对VPS34与PDK1定位的影响 | 第103-104页 |
| 3. 讨论 | 第104-106页 |
| 第三章 PDK1的SUMO化修饰对AKT活性的调控 | 第106-122页 |
| 1. 材料与方法 | 第107-111页 |
| 1.1 病毒与细胞 | 第107页 |
| 1.2 试剂与抗体 | 第107页 |
| 1.3 VP3对AKT与PDK1定位的影响 | 第107-108页 |
| 1.4 PDK1与AKT互作(Pull Down) | 第108页 |
| 1.5 SUMO1对AKT与PDK1互作的影响(CoIP) | 第108页 |
| 1.6 SUMO分子对PDK1点突变与AKT互作的影响 | 第108-109页 |
| 1.7 VP3与Beclin1的互作(Pull Down) | 第109页 |
| 1.8 VP3截短与Beclin1的相互作用 | 第109页 |
| 1.9 VP3对于Beclin1与VPS34定位的影响 | 第109-110页 |
| 1.10 VP3及其截短对LC3Ⅰ/Ⅱ转化的影响 | 第110页 |
| 1.11 VP3及其截短在SUMO1分子的作用下对PDK1的SUMO化影响 | 第110-111页 |
| 1.12 在药物处理的情况下,VP3对P62的变化以及LC3Ⅰ/Ⅱ转化的影响 | 第111页 |
| 1.13 VPS34过表达对VP3引起的P62变化以及LC3-Ⅰ向Ⅱ型转化的影响 | 第111页 |
| 2. 实验结果 | 第111-120页 |
| 2.1 VP3对AKT与PDK1定位的影响 | 第111-112页 |
| 2.2 PDK1与AKT互作(Pull Down) | 第112-113页 |
| 2.3 SUMO1对AKT与PDK1互作的影响(CoIP) | 第113页 |
| 2.4 SUMO分子对PDK1点突变与AKT互作的影响 | 第113-114页 |
| 2.5 VP3与Beclin1的互作(Pull Down) | 第114-115页 |
| 2.6 VP3截短与Beclin1的相互作用 | 第115-116页 |
| 2.7 VP3对于Beclin1与VPS34定位的影响 | 第116页 |
| 2.9 VP3各截短对自噬的影响 | 第116-118页 |
| 2.10 PDK1的SUMO化能够抑制自噬的发生 | 第118-120页 |
| 3. 讨论 | 第120-122页 |
| 全文总结 | 第122-123页 |
| 展望 | 第123-124页 |
| 附表一: 本文研究内容部分所涉及的引物序列 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-145页 |
| 第三部分 附录 | 第145-151页 |
| 附录A 缩略词 | 第145-147页 |
| 附录B 常用缓冲液及培养基配方 | 第147-151页 |
| 攻博期间发表或录用的学术论文 | 第151-152页 |
| 致谢 | 第152页 |
