| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 类黄酮与花色 | 第12-14页 |
| 1.1 类黄酮 | 第12页 |
| 1.2 类黄酮生物合成途径 | 第12-13页 |
| 1.3 花色苷与花色调控 | 第13-14页 |
| 2 基因工程改造花色技术 | 第14-17页 |
| 2.1 导入外源基因 | 第15页 |
| 2.2 反义抑制 | 第15页 |
| 2.3 正义共抑制 | 第15-16页 |
| 2.4 RNA干扰 | 第16页 |
| 2.5 导入调节基因 | 第16页 |
| 2.6 导入辅助基因 | 第16页 |
| 2.7 导入多基因 | 第16-17页 |
| 2.8 核酶抑制 | 第17页 |
| 3 类黄酮生物合成途径相关基因改良花色的研究进展 | 第17-20页 |
| 3.1 苯丙氨酸解氨酶PAL基因研究进展 | 第17页 |
| 3.2 查尔酮异构酶CHT基因研究进展 | 第17-18页 |
| 3.3 二氢黄酮醇-4-还原酶DFR基因研究进展 | 第18-19页 |
| 3.4 黄酮醇合酶FLS基因研究进展 | 第19页 |
| 3.5 花色素合酶ANS基因研究进展 | 第19-20页 |
| 4 研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 芍药类黄酮合成相关基因超表达载体构建 | 第21-44页 |
| 1 材料与方法 | 第21-31页 |
| 1.1 材料 | 第21-23页 |
| 1.1.1 植物材料、载体质粒及菌株 | 第21页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 1.1.4 主要培养基的配制 | 第22-23页 |
| 1.1.5 抗生素的配制 | 第23页 |
| 1.2 方法 | 第23-31页 |
| 1.2.1 类黄酮合成相关基因的克隆 | 第23-26页 |
| 1.2.1.1 总RNA的提取、纯化及检测 | 第23-24页 |
| 1.2.1.2 cDNA第一链的合成 | 第24页 |
| 1.2.1.3 目的基因PCR扩增及检测 | 第24-25页 |
| 1.2.1.4 目的片段的回收、连接、转化及摇菌 | 第25-26页 |
| 1.2.1.5 质粒DNA的提取与检测 | 第26页 |
| 1.2.2 植物超表达载体构建 | 第26-30页 |
| 1.2.2.1 目的基因(含有酶切位点)的获取 | 第27-28页 |
| 1.2.2.2 目的基因及与表达载体pCAMBIA1301双酶切及纯化 | 第28-29页 |
| 1.2.2.3 目的片段与表达载体连接 | 第29页 |
| 1.2.2.4 连接产物的转化 | 第29页 |
| 1.2.2.5 重组质粒菌液PCR验证 | 第29页 |
| 1.2.2.6 重组质粒双酶切验证及检测 | 第29-30页 |
| 1.2.3 采用冻融法将重组质粒转化农杆菌EHA105及筛选鉴定 | 第30-31页 |
| 1.2.3.1 农杆菌EHA105的活化 | 第30页 |
| 1.2.3.2 农杆菌EHA105感受态制备 | 第30页 |
| 1.2.3.3 重组质粒转化农杆菌感受态 | 第30-31页 |
| 1.2.3.4 农杆菌转化子的筛选鉴定及保存 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-42页 |
| 2.1 芍药类黄酮合成相关基因的获取与序列分析 | 第31-35页 |
| 2.1.1 cDNA全长序列的克隆 | 第31-32页 |
| 2.1.2 基因序列分析 | 第32-35页 |
| 2.2 芍药类黄酮合成相关基因表达载体构建 | 第35-40页 |
| 2.2.1 目的基因编码区(含酶切位点)的获取 | 第35页 |
| 2.2.2 pB1301-CHI超表达载体构建及验证 | 第35-36页 |
| 2.2.3 pB1301-ANS超表达载体构建及验证 | 第36-37页 |
| 2.2.4 pB1301-DFR超表达载体构建及验证 | 第37-38页 |
| 2.2.5 pB1301-FLS超表达载体构建及验证 | 第38-39页 |
| 2.2.6 pB1301-PAL超表达载体构建及验证 | 第39-40页 |
| 2.3 重组质粒转化农杆菌 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 芍药类黄酮合成相关基因转化模式植物的初步研究 | 第44-68页 |
| 1 材料与方法 | 第44-53页 |
| 1.1 材料 | 第44-46页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第44页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第44-45页 |
| 1.1.4 主要培养基的配制 | 第45-46页 |
| 1.1.5 主要试剂的配制 | 第46页 |
| 1.2 方法 | 第46-53页 |
| 1.2.1 CHI、ANS、DFR、FLS、PAL基因在拟南芥中的遗传转化 | 第46-51页 |
| 1.2.1.1 拟南芥的培养 | 第46-47页 |
| 1.2.1.2 Floral-dip法侵染拟南芥花序 | 第47页 |
| 1.2.1.3 转基因拟南芥筛选及鉴定 | 第47-49页 |
| 1.2.1.4 纯合转基因拟南芥目的基因荧光定量PCR分析 | 第49-51页 |
| 1.2.2 DFR、FLS基因在烟草中的遗传转化 | 第51-53页 |
| 1.2.2.1 烟草的培养 | 第51页 |
| 1.2.2.2 农杆菌介导的叶盘法侵染烟草 | 第51-52页 |
| 1.2.2.3 转基因烟草GUS染色检测 | 第52页 |
| 1.2.2.4 T_0代转基因烟草的PCR鉴定 | 第52页 |
| 1.2.2.5 T_0代转基因烟草目的基因实时荧光定量PCR分析 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-65页 |
| 2.1 CHI、ANS、DFR、FLS、PAL基因在拟南芥中的遗传转化 | 第53-60页 |
| 2.1.1 Foral-dip法获得转基因拟南芥 | 第53-58页 |
| 2.1.1.1 转基因植株抗性筛选 | 第53页 |
| 2.1.1.2 纯合转基因株系的获得 | 第53-55页 |
| 2.1.1.3 纯合转基因株系的分子鉴定 | 第55-58页 |
| 2.1.2 纯合转基因株系的目的基因实时荧光定量PCR分析 | 第58-60页 |
| 2.1.3 纯合转基因株系表型分析 | 第60页 |
| 2.2 DFR、FLS基因在烟草中的遗传转化 | 第60-65页 |
| 2.2.1 叶盘侵染法获得转基因烟草 | 第60-63页 |
| 2.2.1.1 转基因烟草植株的获得 | 第60-62页 |
| 2.2.1.2 T_0代转基因烟草的PCR鉴定 | 第62-63页 |
| 2.2.2 T_0代转基因烟草目的基因实时荧光定量PCR分析 | 第63-64页 |
| 2.2.3 转基因烟草表型分析 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第79-80页 |
