| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略词 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-38页 |
| 1.1 奶牛乳房炎 | 第15-22页 |
| 1.1.1 奶牛乳房炎的发病机理 | 第15-16页 |
| 1.1.2 奶牛乳房炎的诊断及预防 | 第16-17页 |
| 1.1.3 奶牛金葡菌乳房炎 | 第17-19页 |
| 1.1.4 奶牛金葡菌乳房炎抗性的遗传研究进展 | 第19-22页 |
| 1.2 表观遗传学研究进展 | 第22-27页 |
| 1.2.1 DNA甲基化 | 第23-26页 |
| 1.2.2 奶牛金葡菌乳房炎抗性的DNA甲基化等表观遗传调控研究 | 第26-27页 |
| 1.3 DNA甲基化的研究方法 | 第27-30页 |
| 1.3.1 甲基化敏感的限制性酶切 | 第27-28页 |
| 1.3.2 重亚硫酸盐测序 | 第28-29页 |
| 1.3.3 DNA甲基化免疫共沉淀 | 第29-30页 |
| 1.4 叶酸的研究现状 | 第30-33页 |
| 1.4.1 叶酸的生理功能 | 第31页 |
| 1.4.2 叶酸的抗炎作用 | 第31-32页 |
| 1.4.3 叶酸在癌症发生与发展中的作用 | 第32页 |
| 1.4.4 叶酸在DNA甲基化调控中的作用 | 第32-33页 |
| 1.5 RNAi技术研究进展 | 第33-36页 |
| 1.5.1 RNAi的原理和分子机制 | 第33-34页 |
| 1.5.2 RNAi的分子生物学功能及应用 | 第34-36页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第36-38页 |
| 第二章 中国荷斯坦牛金葡菌隐性乳房炎抗性的全基因组DNA甲基化及其调控 | 第38-63页 |
| 2.1. 材料与方法 | 第39-45页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第39-40页 |
| 2.1.2 试验方法 | 第40-45页 |
| 2.2 结果与分析 | 第45-59页 |
| 2.2.1 样品DNA质检及超声破碎 | 第45-46页 |
| 2.2.2 DNA免疫共沉淀 | 第46-47页 |
| 2.2.3 MeDIP芯片原始数据标准化 | 第47-48页 |
| 2.2.4 牛外周血淋巴细胞启动子区DNA甲基化分布特点 | 第48-52页 |
| 2.2.5 差异甲基化基因功能和通路分析 | 第52-54页 |
| 2.2.6 DNA甲基化与基因转录调控 | 第54页 |
| 2.2.7 差异甲基化基因与差异表达基因分析 | 第54-58页 |
| 2.2.8 重亚硫酸盐测序-PCR (BCP)验证MeDIP-chip数据 | 第58-59页 |
| 2.3 讨论 | 第59-62页 |
| 2.3.1 奶牛金葡菌隐性乳房炎的鉴定 | 第59-60页 |
| 2.3.2 MeDIP-chip技术 | 第60页 |
| 2.3.3 金葡菌隐性乳房炎牛与健康牛外周血淋巴细胞DNA甲基化差异 | 第60-61页 |
| 2.3.4 金葡菌隐性乳房炎牛启动子区DNA甲基化与基因表达调控 | 第61页 |
| 2.3.5 差异甲基化且差异表达基因 | 第61-62页 |
| 2.4 小结 | 第62-63页 |
| 第三章 金葡菌感染牛乳腺上皮细胞系体外模型的构建 | 第63-79页 |
| 3.1 材料与方法 | 第63-71页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第63-65页 |
| 3.1.2 试验方法 | 第65-71页 |
| 3.2 结果与分析 | 第71-76页 |
| 3.2.1 金葡菌(S. aureus)菌株与MRSA菌株特异性分子鉴定 | 第71-72页 |
| 3.2.2 Mac-T细胞培养状态 | 第72页 |
| 3.2.3 实时荧光定量PCR检测S.aureus和MRSA的标准曲线 | 第72-73页 |
| 3.2.4 S.aureus和MRSA对Mac-T细胞的粘附趋势 | 第73-74页 |
| 3.2.5 S.aureus和MRSA对Mac-T细胞的入侵趋势 | 第74-75页 |
| 3.2.6 奶牛金葡菌乳房炎体外模型的建立 | 第75-76页 |
| 3.3 讨论 | 第76-77页 |
| 3.3.1 奶牛乳腺上皮细胞系 | 第76页 |
| 3.3.2 金葡菌对奶牛乳腺上皮细胞系的粘附和入侵 | 第76-77页 |
| 3.3.3 体外奶牛金葡菌乳房炎细胞模型的建立 | 第77页 |
| 3.4 小结 | 第77-79页 |
| 第四章 奶牛金葡菌乳房炎抗性候选基因的功能验证 | 第79-89页 |
| 4.1 试验材料与方法 | 第79-82页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第79-80页 |
| 4.1.2 试验方法 | 第80-82页 |
| 4.2 结果与分析 | 第82-86页 |
| 4.2.1 TRAPPC9与JAK2基因沉默效率检测 | 第82-83页 |
| 4.2.2 金葡菌攻菌对抗性候选基因TRAPPC9与JAK2沉默后mRNA表达水平的影响 | 第83-84页 |
| 4.2.3 沉默TRAPPC9与JAK2基因对其它乳房炎相关基因mRNA表达水平的影响 | 第84页 |
| 4.2.4 沉默TRAPPC9与JAK2基因对炎症相关基因mRNA表达水平的影响 | 第84-86页 |
| 4.3 讨论 | 第86-88页 |
| 4.3.1 候选基因的选择 | 第86页 |
| 4.3.2 TRAPPC9和JAK2基因的沉默对金葡菌乳房炎的影响 | 第86-87页 |
| 4.3.3 TRAPPC9和JAK2基因的沉默对其他金葡菌乳房炎抗性候选基因的影响 | 第87页 |
| 4.3.4 TRAPPC9和JAK2基因的沉默对炎症相关基因的影响 | 第87-88页 |
| 4.4 小结 | 第88-89页 |
| 第五章 叶酸提高奶牛金葡菌乳房炎抗性的分子机理研究 | 第89-100页 |
| 5.1 试验材料与方法 | 第89-91页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第89-90页 |
| 5.1.2 试验方法 | 第90-91页 |
| 5.2 结果与分析 | 第91-96页 |
| 5.2.1 叶酸对奶牛金葡菌乳房炎的作用 | 第91-92页 |
| 5.2.2 叶酸处理对TRAPPC9与JAK2基因沉默后mRNA表达水平的影响 | 第92-93页 |
| 5.2.3 叶酸处理对TRAPPC9与JAK2基因沉默后蛋白表达水平的影响 | 第93-94页 |
| 5.2.4 叶酸处理对TRAPPC9-KD和JAK2-KD细胞中炎症相关基因表达水平的影响 | 第94-95页 |
| 5.2.5 叶酸处理对金葡菌入侵到TRAPPC9-KD和JAK2-KD Mac-T细胞数目的影响 | 第95-96页 |
| 5.3 讨论 | 第96-99页 |
| 5.3.1 叶酸添加对奶牛金葡菌乳房炎的影响 | 第96-97页 |
| 5.3.2 叶酸处理对TRAPPC9与JAK2基因沉默后mRNA和蛋白表达水平的影响 | 第97页 |
| 5.3.3 叶酸处理可抑制MRSA入侵到TRAPPC9-KD和JAK2-KD Mac-T细胞 | 第97-98页 |
| 5.3.4 叶酸提高奶牛金葡菌乳房炎抗性的分子机理 | 第98-99页 |
| 5.4 小结 | 第99-100页 |
| 第六章 结论 | 第100-102页 |
| 6.1 主要结论 | 第100页 |
| 6.2 下一步研究工作 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 附录 | 第111-119页 |
| 个人简历 | 第119-120页 |
