| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 本文缩略语表 | 第9-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| 第一节 菌丝霉素的结构与生化特性 | 第14-15页 |
| 第二节 菌丝霉素的生物学活性 | 第15-18页 |
| 第三节 菌丝霉素的分子结构、功能和作用机制 | 第18-21页 |
| 1. 菌丝霉素结构与功能的关系 | 第18-19页 |
| 2. 菌丝霉素的抑菌作用机制 | 第19-21页 |
| 第四节 菌丝霉素基因工程研究进展 | 第21页 |
| 第五节 基因串联的构建方法 | 第21-23页 |
| 第二章 本研究的目的、内容、意义与技术路线 | 第23-25页 |
| 1. 研究目的 | 第23页 |
| 2. 研究内容 | 第23页 |
| 3. 研究的意义 | 第23页 |
| 4. 研究的技术路线 | 第23-25页 |
| 第三章 试验研究 | 第25-69页 |
| 第一节 菌丝霉素单体基因在大肠杆菌中的表达 | 第25-43页 |
| 1. 单体基因克隆与表达策略 | 第25页 |
| 2. 试验材料 | 第25-28页 |
| 3. 试验方法 | 第28-36页 |
| 3.1 菌丝霉素单体基因的优化 | 第28-29页 |
| 3.2 菌丝霉素单体基因的生成 | 第29-30页 |
| 3.3 菌丝霉素单体基因的TA克隆 | 第30-31页 |
| 3.4 菌丝霉素单体基因TA克隆质粒鉴定 | 第31-32页 |
| 3.5 菌丝霉素单体基因表达载体的构建 | 第32-34页 |
| 3.6 重组原核表达菌株的构建与诱导表达 | 第34-36页 |
| 4. 试验结果 | 第36-41页 |
| 4.1 SOE-PCR 结果 | 第36-37页 |
| 4.2 TA克隆质粒鉴定 | 第37-38页 |
| 4.3 核苷酸序列比较 | 第38页 |
| 4.4 重组表达载体双酶切结果 | 第38-39页 |
| 4.5 SDS-PAGE 分析 | 第39-40页 |
| 4.6 Western Blot 分析 | 第40-41页 |
| 5. 讨论 | 第41-42页 |
| 6. 小结 | 第42-43页 |
| 第二节 菌丝霉素多聚体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达 | 第43-58页 |
| 1. 多聚体基因构建策略 | 第43页 |
| 2. 试验材料 | 第43-44页 |
| 3. 试验方法 | 第44-48页 |
| 3.1 菌丝霉素二聚体克隆质粒的构建 | 第44-47页 |
| 3.2 菌丝霉素三聚体克隆质粒的构建 | 第47页 |
| 3.3 菌丝霉素四聚体克隆质粒的构建 | 第47页 |
| 3.4 菌丝霉素八聚体克隆质粒的构建 | 第47页 |
| 3.5 各重组表达载体与重组表达菌的构建 | 第47页 |
| 3.6 重组大肠杆菌的诱导表达 | 第47-48页 |
| 3.7 宿主菌菌内抑菌活性检测 | 第48页 |
| 4. 试验结果 | 第48-56页 |
| 4.1 TA克隆质粒的鉴定 | 第48-50页 |
| 4.2 核苷酸序列比较 | 第50页 |
| 4.3 重组表达质粒酶切鉴定结果 | 第50-51页 |
| 4.4 SDS-PAGE 分析 | 第51-54页 |
| 4.5 Western Blot 分析 | 第54页 |
| 4.6 融合表达产物的体内抑菌活性检测 | 第54-56页 |
| 5. 讨论 | 第56-57页 |
| 6. 小结 | 第57-58页 |
| 第三节 重组菌丝霉素的分离纯化及其抗菌效果研究 | 第58-69页 |
| 1. 试验材料 | 第58-59页 |
| 2. 试验方法 | 第59-62页 |
| 2.1 重组蛋白的可溶性分析 | 第59-60页 |
| 2.2 目的融合蛋白纯化 | 第60页 |
| 2.3 融合蛋白的裂解与纯化 | 第60页 |
| 2.4 Tricine-SDS-PAGE 电泳 | 第60-61页 |
| 2.5 重组菌丝霉素的体外抑菌活性检测 | 第61-62页 |
| 2.6 重组菌丝霉素的溶血活性检测 | 第62页 |
| 3. 试验结果 | 第62-66页 |
| 3.1 融合蛋白的纯化 | 第62-64页 |
| 3.2 Tricine-SDS-PAGE 电泳 | 第64-65页 |
| 3.3 重组菌丝霉素的体外抑菌活性与溶血活性鉴定 | 第65-66页 |
| 4. 讨论 | 第66-67页 |
| 5. 结论 | 第67-69页 |
| 第四章 全文总结、创新点与研究展望 | 第69-72页 |
| 一、全文总结与结论 | 第69-70页 |
| 二、本文主要创新点 | 第70页 |
| 三、有待进一步解决的问题 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 附录一 | 第79-80页 |
| 附录二 | 第80-81页 |
| 附录三 | 第81-82页 |
| 附录四 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文和获奖情况 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |