摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-7页 |
缩略词与中英文对照 | 第8-12页 |
1 前言 | 第12-17页 |
1.1 影响直链淀粉含量因素及研究进展 | 第12-16页 |
1.1.1 淀粉的合成及直链淀粉的性质 | 第12-13页 |
1.1.2 影响直链淀粉含量的遗产因素 | 第13-15页 |
1.1.3 影响直链淀粉含量的环境因素 | 第15-16页 |
1.2 研究目的及意义 | 第16-17页 |
2 材料与方法 | 第17-33页 |
2.1 材料 | 第17页 |
2.2 菌株和质粒载体 | 第17-18页 |
2.2.1 菌株 | 第17页 |
2.2.2 质粒载体 | 第17-18页 |
2.3 PCR扩增引物 | 第18页 |
2.4 主要仪器设备 | 第18-19页 |
2.5 主要试剂和药品 | 第19页 |
2.6 主要溶液及试剂配方 | 第19-23页 |
2.6.1 1000×木村B营养母液 | 第19-20页 |
2.6.2 细菌培养基 | 第20页 |
2.6.3 植物培养基 | 第20页 |
2.6.4 抗生素贮存液 | 第20-21页 |
2.6.5 植物激素母液 | 第21页 |
2.6.6 RNA抽提所需试剂 | 第21页 |
2.6.7 水稻瞬时表达试剂配制 | 第21-23页 |
2.7 OsAT1的生物信息学分析 | 第23-24页 |
2.8 实验方法 | 第24-33页 |
2.8.1 目的片段的扩增 | 第24-25页 |
2.8.2 酶切片段的连接 | 第25页 |
2.8.3 大肠杆菌感受态细胞的制备和热激转化法 | 第25页 |
2.8.4 质粒提取及阳性质粒鉴定 | 第25页 |
2.8.5 阳性克隆的序列测定与分析 | 第25-26页 |
2.8.6 农杆菌感受态细胞的制备和冻融转化法 | 第26页 |
2.8.7 农杆菌转化子阳性克隆的鉴定 | 第26页 |
2.8.8 水稻组织培养及转化 | 第26-27页 |
2.8.9 快速提取DNA的方法 | 第27-28页 |
2.8.10 叶片总的mRNA的提取(Trizol法) | 第28页 |
2.8.11 RNA中微量DNA的去除 | 第28页 |
2.8.12 反转录cDNA第一链的合成 | 第28-29页 |
2.8.13 Real-time PCR检测mRNA水平的表达 | 第29页 |
2.8.14 可溶性糖和淀粉含量的测定 | 第29页 |
2.8.15 直链淀粉含量的测定 | 第29-30页 |
2.8.16 水稻原生质体的游离与转化 | 第30-31页 |
2.8.17 GUS染色 | 第31页 |
2.8.18 OsAT1转基因植株中元素含量的测定 | 第31页 |
2.8.19 水稻籽粒RNA-seq测序及分析 | 第31-32页 |
2.8.20 实验数据处理及分析 | 第32-33页 |
3 结果与分析 | 第33-60页 |
3.1 OsAT1家族基因生物信息学分析 | 第33-36页 |
3.1.1 OsAT1蛋白理化性质分析 | 第33-34页 |
3.1.2 OsAT1基因进化树 | 第34-35页 |
3.1.3 OsAT1蛋白亚细胞定位分析 | 第35-36页 |
3.2 OsAT1在水稻中的表达分析 | 第36-43页 |
3.2.1 OsAT1的亚细胞定位 | 第36-39页 |
3.2.2 OsAT1在水稻不同组织中的表达分析 | 第39-40页 |
3.2.3 OsAT1启动子驱动GUS在转基因水稻中的表达分析 | 第40-43页 |
3.3 OsAT1基因的表达对水稻生长的影响 | 第43-47页 |
3.4 OsAT1基因的表达对水稻叶片中各种元素含量的影响 | 第47-49页 |
3.5 OsAT1调控水稻籽粒中相关基因的表达分析 | 第49-57页 |
3.6 OsAT1标签蛋白载体构建和遗传转化 | 第57-60页 |
4讨论与结论 | 第60-65页 |
4.1 OsAT1可能是一个新的硼运输蛋白 | 第60-61页 |
4.2 过量表达OsAT1导致水稻籽粒中直链淀粉含量下降可能与硼元素相关 | 第61-63页 |
4.3 进一步的研究设想 | 第63-65页 |
致谢 | 第65-66页 |
参考文献 | 第66-72页 |
附录 | 第72页 |