| AKNOWLEDGEMENTS | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 摘要 | 第10-22页 |
| CHAPTER 1: GENERAL INTRODUCTION AND LITERATURE REVIEW | 第22-58页 |
| 1.1. General introduction | 第22-23页 |
| 1.2. Literature review | 第23-47页 |
| 1.2.1. L-Ascorbic acid | 第23-32页 |
| 1.2.1.1. Description | 第23-24页 |
| 1.2.1.2. Biological function of L-AA | 第24-26页 |
| (1) L-AA as cofactor | 第24-25页 |
| (2) L-AA as a radical scavenger | 第25-26页 |
| 1.2.1.3. Stability of L-AA | 第26页 |
| 1.2.1.4. Deficiency in L-AA | 第26-27页 |
| 1.2.1.5. Sources of L-AA | 第27-29页 |
| 1.2.1.6. Biosynthesis of L-AA | 第29-30页 |
| (1) Biosynthesis of L-AA by animals | 第29-30页 |
| (2) Biosynthesis of L-AA by plants | 第30页 |
| 1.2.1.7. Manufacturing of L-AA | 第30-32页 |
| 1.2.2. L-Ascorbic acid derivatives | 第32-45页 |
| 1.2.2.1. L-Ascorbic acid non-glucosides | 第32-34页 |
| (1) AA-2P | 第33页 |
| (2) AA-2S | 第33页 |
| (3) AA-2M | 第33页 |
| (4) Ascorbyl palmitate | 第33-34页 |
| 1.2.2.2. L-Ascorbic acid glucosides | 第34-45页 |
| (1) AA-6G | 第34-35页 |
| (2) AA-2G | 第35-41页 |
| (3) 6-Acyl-AA-2G | 第41页 |
| (4) AA-5G | 第41-42页 |
| (5) AA-3G | 第42页 |
| (6) AA2ΒG | 第42-43页 |
| (7) AA6 ΒG | 第43-45页 |
| 1.2.3. Cyclodextrin glucanotransferase | 第45-46页 |
| 1.2.4. Amylosurase | 第46页 |
| 1.2.5. Ultrasonic radiation | 第46-47页 |
| 1.3. Main objective | 第47-48页 |
| 1.3.1. Specific objectives | 第47-48页 |
| 1.4. References | 第48-58页 |
| CHAPTER 2: BIOSYNTHESIS OF 2-O-Α-D- GLUCOPYRANOSYL-L-ASCORBIC ACID BYCGTASE FROM B ACILLUS SP SK13.002 | 第58-80页 |
| 2.1. Introduction | 第58-60页 |
| 2.2. Materials and methods | 第60-65页 |
| 2.2.1. Materials | 第60页 |
| 2.2.2. Methods | 第60-65页 |
| 2.2.2.1. CGTase activity assay (Hydrolytic activity) | 第60页 |
| 2.2.2.2. Bacterial strain and partially purified enzyme production | 第60-61页 |
| 2.2.2.3. Preparation of β-CD affinity column | 第61-62页 |
| 2.2.2.4. Purification of CGTase by β-CD affinity column | 第62页 |
| 2.2.2.5. Protein determination | 第62页 |
| 2.2.2.6. Molecular weight determination | 第62-63页 |
| 2.2.2.7. Enzymatic production of AA-2G | 第63页 |
| 2.2.2.8. HPLC analysis of AA-2G | 第63-64页 |
| 2.2.2.9. Conformation of AA-2G production by LC-MS/MS | 第64-65页 |
| 2.3. Results and discussion | 第65-74页 |
| 2.3.1. Homogeneity and molecular weight of the enzyme | 第65页 |
| 2.3.2. Enzymatic production of AA-2G and glycosyl donor specificity | 第65-68页 |
| 2.3.3. Identification of AA-2G by LC-MS/MS | 第68-70页 |
| 2.3.4. Optimization of AA-2G biosynthesis | 第70-74页 |
| 2.3.4.1. Effect of p H and temperature on biosynthesis of AA-2G | 第70-72页 |
| 2.3.4.2. Effect of time course and substrate ratios on biosynthesis of AA-2G | 第72-73页 |
| 2.3.4.3. Effect of enzyme concentration on biosynthesis of AA-2G | 第73-74页 |
| 2.4. Conclusion | 第74-75页 |
| 2.5. References | 第75-80页 |
| CHAPTER 3: BIOSYNTHESIS OF 2-O-Α-D- GLUCOPYRANOSYL-L-ASCORBIC ACID BYAMYLOSUCRASE FROM NEISSERIA POLYSACCHAREA | 第80-98页 |
| 3.1. Introduction | 第80-82页 |
| 3.2. Materials and methods | 第82-85页 |
| 3.2.1. Materials | 第82页 |
| 3.2.2. Methods | 第82-85页 |
| 3.2.2.1. Bacterial strain and plasmid | 第82页 |
| 3.2.2.2. Purification of recombinant NPAS | 第82-83页 |
| 3.2.2.3. Enzyme assay | 第83-84页 |
| 3.2.2.4. Production of AA-2G by NPAS | 第84页 |
| 3.2.2.5. Analysis of AA-2G | 第84页 |
| 3.2.2.6. Conformation of AA-2G production by LC-MS/MS | 第84-85页 |
| 3.3. Results and discussion | 第85-93页 |
| 3.3.1. Purification of NPAS | 第85-86页 |
| 3.3.2. Enzymatic production of AA-2G by NPAS | 第86-87页 |
| 3.3.3. Identification of AA-2G by LC-MS/MS | 第87-88页 |
| 3.3.4. Optimization of the transglycosylation reaction conditions | 第88-93页 |
| 3.3.4.1. Effect of donor/ acceptor molar ratio | 第88-89页 |
| 3.3.4.2. Effect of p H | 第89-90页 |
| 3.3.4.3. Effect of temperature and time on AA-2G production by NPAS | 第90-91页 |
| 3.3.4.4. Effect of NPAS concentration on AA-2G production | 第91-93页 |
| 3.4. Conclusion | 第93-94页 |
| 3.5. References | 第94-98页 |
| CHAPTER 4: BIOTRANSFORMATIOM OF 2-O-Α-D- GLUCOPYRANOSYL-L-ASCORBICACID BY WHOLE-CELL | 第98-108页 |
| 4.1. Introduction | 第98-99页 |
| 4.2. Materials and methods | 第99-101页 |
| 4.2.1. Materials | 第99页 |
| 4.2.2. Methods | 第99-101页 |
| 4.2.2.1. Bacterial strain plasmid and cell production | 第99-100页 |
| 4.2.2.2. Biotransformation by whole-cell | 第100页 |
| 4.2.2.3. Analysis of AA-2G | 第100-101页 |
| 4.3. Results and discussion | 第101-105页 |
| 4.3.1. Effect of p H on AA-2G production | 第101页 |
| 4.3.2. Effect of cell concentration | 第101-102页 |
| 4.3.3. Effect of carbohydrates on AA-2G production | 第102-103页 |
| 4.3.4. Effect of D-glucose concentration on biotransformation of AA-2G | 第103-104页 |
| 4.3.5. Effect of time on biotransformation of AA-2G | 第104-105页 |
| 4.4. Conclusion | 第105-106页 |
| 4.5. References | 第106-108页 |
| CHAPTER 5: IMPROVING THE BIOSYNTHESIS OF 2-O-Α-D- GLUCOPYRANOSYL-L-ASCORBIC ACID BY ULTRASONIC IRRADIATION TREATMENT | 第108-130页 |
| 5.1. Introduction | 第108-109页 |
| 5.2. Materials and methods | 第109-113页 |
| 5.2.1. Materials | 第109页 |
| 5.2.2. Ultrasonic equipment | 第109-110页 |
| 5.2.3. Ultrasonic/shake equipment | 第110-111页 |
| 5.2.4. Methods | 第111-113页 |
| 5.2.4.1. Hydrolytic activity of CGTase | 第111页 |
| 5.2.4.2. Cyclization activity of CGTase | 第111页 |
| 5.2.4.3. Purification of CGTase | 第111-112页 |
| 5.2.4.4. Biosynthesis of AA-2G | 第112页 |
| 5.2.4.5. HPLC analysis of AA-2G | 第112页 |
| 5.2.4.6. Production of AA-2G using ultrasonic power | 第112页 |
| 5.2.4.7. Intrinsic fluorescence analysis | 第112-113页 |
| 5.2.4.8. Circular dichroism | 第113页 |
| 5.2.4.9. Statistical analysis | 第113页 |
| 5.3. Results and discussion | 第113-125页 |
| 5.3.1. Biosynthesis of AA-2G under ultrasonic radiation | 第113-116页 |
| 5.3.2. Optimization of AA-2G biosynthesis under ultrasonic radiation | 第116-117页 |
| 5.3.3. Biosynthesis of AA-2G under ultrasonic/shake | 第117-118页 |
| 5.3.4. Optimization of AA-2G biosynthesis under ultrasonic/shake | 第118-120页 |
| 5.3.5. Effect of ultrasonic/shake on CGTase structure | 第120-123页 |
| 5.3.6. Effect of ultrasonic/shake on CGTase activities | 第123-125页 |
| 5.4. Conclusion | 第125-126页 |
| 5.5. References | 第126-130页 |
| GENERAL CONCULSION AND RECOMMENDATIONS | 第130-132页 |
| General conclusion | 第130-131页 |
| Key innovation of thesis | 第131页 |
| Recommendations | 第131-132页 |
| LIST OF PUBLICATIONS | 第132页 |
