| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| 1.1 高尔基体的结构与功能 | 第11-12页 |
| 1.2 高尔基体磷酸化蛋白 2（GOLPH2）的发现及进一步研究 | 第12-20页 |
| 1.2.1 GOLPH2的发现 | 第12-13页 |
| 1.2.2 GOLPH2的基因及蛋白结构 | 第13-14页 |
| 1.2.3 GOLPH2的分布 | 第14页 |
| 1.2.4 GOLPH2的进一步研究 | 第14-20页 |
| 1.3 免疫系统的组成和功能 | 第20-24页 |
| 1.3.1 固有免疫和适应性免疫 | 第20-21页 |
| 1.3.2 适应性免疫的特点 | 第21页 |
| 1.3.3 抗原的处理和提呈 | 第21页 |
| 1.3.4 抗原提呈细胞 | 第21-22页 |
| 1.3.5 T细胞 | 第22-23页 |
| 1.3.6 B细胞 | 第23-24页 |
| 1.4 研究意义 | 第24-26页 |
| 第二章 GOLPH2对IL-12的抑制作用 | 第26-36页 |
| 2.1 前言 | 第26-27页 |
| 2.2 材料与方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 材料 | 第27-30页 |
| 2.2.1.1 主要试剂与耗材 | 第27-28页 |
| 2.2.1.2 主要仪器 | 第28页 |
| 2.2.1.3 小鼠 | 第28页 |
| 2.2.1.4 GOLPH2重组蛋白 | 第28页 |
| 2.2.1.5 p35和p40启动子报告基因表达质粒 | 第28页 |
| 2.2.1.6 DMEM完全培养基 | 第28-29页 |
| 2.2.1.7 BMDM诱导培养基 | 第29页 |
| 2.2.1.8 荧光素酶检测细胞裂解液（5×） | 第29页 |
| 2.2.1.9 荧光素酶检测底物缓冲液 | 第29页 |
| 2.2.1.10 TXS溶液 | 第29-30页 |
| 2.2.2 方法 | 第30-33页 |
| 2.2.2.1 rGOLPH2 的内毒素去除 | 第30页 |
| 2.2.2.2 细胞的培养和传代 | 第30页 |
| 2.2.2.3 BMDM的诱导和激活 | 第30-31页 |
| 2.2.2.4 RNA的提取及RT-PCR | 第31页 |
| 2.2.2.5 荧光定量PCR | 第31页 |
| 2.2.2.6 RAW264.7 细胞的电转染 | 第31页 |
| 2.2.2.7 荧光素酶活性测定 | 第31-32页 |
| 2.2.2.8 质粒的转化 | 第32页 |
| 2.2.2.9 细菌的培养和质粒提取 | 第32页 |
| 2.2.2.10 质粒内毒素的去除 | 第32页 |
| 2.2.2.11 数据处理 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-36页 |
| 2.3.1 rGOLPH2对巨噬细胞中IL-12 p35和p40转录的作用 | 第33-34页 |
| 2.3.2 rGOLPH2对p35和p40启动子活性的效应 | 第34-36页 |
| 第三章 GOLPH2基因敲除小鼠的构建 | 第36-47页 |
| 3.1 前言 | 第36页 |
| 3.2 材料与方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.2.1.1 主要试剂与耗材 | 第36-37页 |
| 3.2.1.2 Tail Buffer | 第37页 |
| 3.2.1.3 引物 | 第37页 |
| 3.2.2 方法 | 第37-39页 |
| 3.2.2.1 GOLPH2敲除小鼠受精卵的制备 | 第37-38页 |
| 3.2.2.2 小鼠基因组制备 | 第38页 |
| 3.2.2.3 小鼠基因型测序鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.2.4 小鼠组织RNA的提取 | 第39页 |
| 3.2.2.5 数据处理 | 第39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-47页 |
| 3.3.1 F_1代杂合子小鼠的获得 | 第39-41页 |
| 3.3.2 敲除鉴定引物的设计 | 第41-42页 |
| 3.3.3 敲除纯合子鼠的获得 | 第42-45页 |
| 3.3.4 小鼠体内GOLPH2 mRNA的检测 | 第45-47页 |
| 第四章 GOLPH2敲除小鼠生理指标的检测及GOLPH2在小鼠急性炎症反应中作用的初步探究 | 第47-60页 |
| 4.1 前言 | 第47-48页 |
| 4.2 材料与方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 材料 | 第48页 |
| 4.2.1.1 主要试剂与耗材 | 第48页 |
| 4.2.1.2 主要仪器 | 第48页 |
| 4.2.2 方法 | 第48-50页 |
| 4.2.2.1 脾细胞的分离及流式检测 | 第48-49页 |
| 4.2.2.2 血细胞组成及生理指标的检测 | 第49页 |
| 4.2.2.3 血清的收集 | 第49页 |
| 4.2.2.4 内毒素休克模型的建立 | 第49页 |
| 4.2.2.5 ELISA检测血清中细胞因子的含量 | 第49页 |
| 4.2.2.6 数据处理 | 第49-50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-60页 |
| 4.3.1 GOLPH2敲除小鼠与野生型小鼠外观、行为方式的比较 | 第50页 |
| 4.3.2 血细胞组成及生理指标的检测 | 第50-53页 |
| 4.3.3 脾细胞组成的检测 | 第53-55页 |
| 4.3.4 组织HE染色 | 第55-56页 |
| 4.3.5 内毒素休克模型中血细胞组成及生理指标的检测 | 第56-58页 |
| 4.3.6 内毒素休克模型中ELISA检测血清细胞因子 | 第58-60页 |
| 第五章 BMDC的RNA测序结果及分析 | 第60-72页 |
| 5.1 前言 | 第60页 |
| 5.2 材料与方法 | 第60-61页 |
| 5.2.1 材料 | 第60-61页 |
| 5.2.1.1 主要试剂 | 第60-61页 |
| 5.2.1.2 BMDC诱导培养基 | 第61页 |
| 5.2.2 方法 | 第61页 |
| 5.2.2.1 BMDC的诱导和培养 | 第61页 |
| 5.2.2.2 BMDC的刺激 | 第61页 |
| 5.2.2.3 RNA测序 | 第61页 |
| 5.3 结果与分析 | 第61-72页 |
| 5.3.1 测序样品及测序方法 | 第61-62页 |
| 5.3.2 测序质量评估 | 第62-64页 |
| 5.3.3 差异表达基因的统计 | 第64-66页 |
| 5.3.4 差异表达基因的验证 | 第66-67页 |
| 5.3.5 差异表达基因的GO聚类分析 | 第67-70页 |
| 5.3.6 差异表达基因的KEGG Pathway显著性富集分析 | 第70-72页 |
| 第六章 全文总结与讨论 | 第72-73页 |
| 6.1 全文总结 | 第72页 |
| 6.2 进一步研究的方向及展望 | 第72-73页 |
| 附表及附图 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文和专利 | 第82-84页 |
