| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-55页 |
| 1.1 引言 | 第9-10页 |
| 1.2 磷酸化 | 第10-16页 |
| 1.2.1 概述 | 第10页 |
| 1.2.2 激酶 | 第10-12页 |
| 1.2.3 磷酸酶 | 第12页 |
| 1.2.4 磷酸化位点 | 第12-13页 |
| 1.2.5 磷酸化作用 | 第13-16页 |
| 1.3 单磷酸腺苷化 | 第16-44页 |
| 1.3.1 概述 | 第16页 |
| 1.3.2 Fic结构域特征 | 第16-18页 |
| 1.3.3 Fic蛋白的催化机理 | 第18-20页 |
| 1.3.4 Fic蛋白的靶标 | 第20-21页 |
| 1.3.5 Fic蛋白的调控 | 第21-22页 |
| 1.3.6 Fic蛋白的自修饰 | 第22-24页 |
| 1.3.7 Fic蛋白的分类 | 第24-25页 |
| 1.3.8 fic基因分布与进化 | 第25页 |
| 1.3.9 几个重要的Fic蛋白 | 第25-40页 |
| 1.3.10 Fic靶标检测和筛选 | 第40-42页 |
| 1.3.11 Fic蛋白抑制剂筛选 | 第42-44页 |
| 1.4 拓扑异构酶 | 第44页 |
| 1.5 DNA促旋酶和拓扑异构酶Ⅳ | 第44-51页 |
| 1.5.1 结构特征 | 第45-46页 |
| 1.5.2 活性抑制 | 第46-51页 |
| 1.6 假单胞菌 | 第51-52页 |
| 1.7 荧光假单胞菌2P24 | 第52-54页 |
| 1.8 研究目的与意义 | 第54页 |
| 1.9 研究内容 | 第54-55页 |
| 第二章 2P24菌株Fic蛋白生物学功能分析 | 第55-71页 |
| 2.1 材料与方法 | 第55-58页 |
| 2.1.1 供试菌株、质粒及培养条件 | 第55页 |
| 2.1.2 培养基和溶液 | 第55-56页 |
| 2.1.3 序列分析 | 第56页 |
| 2.1.4 引物设计 | 第56页 |
| 2.1.5 DNA操作方法 | 第56-57页 |
| 2.1.6 化学感受态细胞制备 | 第57页 |
| 2.1.7 质粒接合转移 | 第57页 |
| 2.1.8 基因内缺失突变体构建 | 第57页 |
| 2.1.9 抗体及其制备 | 第57-58页 |
| 2.1.10 蛋白免疫印迹杂交 | 第58页 |
| 2.1.11 数据整理与分析 | 第58页 |
| 2.2 结果与分析 | 第58-69页 |
| 2.2.1 Fic蛋白序列分析 | 第58-61页 |
| 2.2.2 fic-1影响质粒DNA复制 | 第61-64页 |
| 2.2.3 fic-1抑制菌株生长 | 第64-65页 |
| 2.2.4 fic-1抑制DNA分离和细胞分裂 | 第65-67页 |
| 2.2.5 fic-1诱导SOS反应 | 第67-69页 |
| 2.3 讨论 | 第69-71页 |
| 第三章 Fic蛋白作用靶标筛选和催化机制的研究 | 第71-90页 |
| 3.1 材料与方法 | 第71-74页 |
| 3.1.1 供试菌株、质粒及培养条件 | 第71页 |
| 3.1.2 细菌双杂交筛选 | 第71-72页 |
| 3.1.3 耶尔森菌蛋白诱导表达 | 第72页 |
| 3.1.4 共表达Fic-1和互作蛋白 | 第72页 |
| 3.1.5 蛋白纯化 | 第72-73页 |
| 3.1.6 单磷酸腺苷化反应 | 第73页 |
| 3.1.7 ATP水解活性 | 第73-74页 |
| 3.1.8 DNA超螺旋和松弛 | 第74页 |
| 3.2 结果与分析 | 第74-87页 |
| 3.2.1 Fic-1互作蛋白筛选 | 第74-76页 |
| 3.2.2 Fic-1修饰GyrB和ParE | 第76-77页 |
| 3.2.3 Fic-1修饰PfGyrB的Tyr111和PfParE的Tyr~(109) | 第77-80页 |
| 3.2.4 其他细菌Fic蛋白修饰GyrB和ParE的能力 | 第80-82页 |
| 3.2.5 Fic影响DNA促旋酶或拓扑异构酶Ⅳ活性 | 第82-84页 |
| 3.2.6 表达Fic蛋白影响DNA分离 | 第84-87页 |
| 3.3 讨论 | 第87-90页 |
| 第四章 Fic-1和AntF的调控初探 | 第90-106页 |
| 4.1 材料与方法 | 第90-91页 |
| 4.1.1 供试菌株、质粒及培养条件 | 第90页 |
| 4.1.2 启动子序列分析 | 第90页 |
| 4.1.3 转录起始位点检测 | 第90-91页 |
| 4.1.4 启动子活性测定 | 第91页 |
| 4.1.5 基因内缺失突变体构建 | 第91页 |
| 4.1.6 AntF的体外降解 | 第91页 |
| 4.1.7 AntF的体内降解 | 第91页 |
| 4.2 结果与分析 | 第91-102页 |
| 4.2.1 Fic-1自修饰影响活性 | 第91-92页 |
| 4.2.2 fic-1与antF共转录 | 第92-95页 |
| 4.2.3 fic-1转录不依赖RpoS | 第95-96页 |
| 4.2.4 AntF抑制Fic-1活性 | 第96页 |
| 4.2.5 Lon蛋白酶降解AntF | 第96-102页 |
| 4.3 讨论 | 第102-106页 |
| 第五章 结论与展望 | 第106-109页 |
| 5.1 结论 | 第106-107页 |
| 5.2 展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 附录 | 第127-167页 |
| 附图1 pDB-His质粒限制性酶切图谱及DNA序列 | 第127-130页 |
| 附图2 pBS-Flag质粒限制性酶切图谱及DNA序列 | 第130-133页 |
| 附表1 菌株和载体列表 | 第133-135页 |
| 附表2 用作Fic-1互作分析的基因 | 第135-137页 |
| 附表3 试验所用质粒 | 第137-149页 |
| 附表4 引物列表 | 第149-167页 |
| 作者简历 | 第167-168页 |
