| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-34页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第15-16页 |
| 1.2 胚胎附植 | 第16-17页 |
| 1.2.1 猪胚胎/胎儿死亡的原因 | 第16-17页 |
| 1.2.2 胚胎附植过程 | 第17页 |
| 1.3 HOXA10 基因在胚胎附植过程中的作用 | 第17-23页 |
| 1.3.1 HOXA10 基因概述 | 第17-18页 |
| 1.3.2 HOXA10 基因与子宫内膜容受性 | 第18-19页 |
| 1.3.3 调节HOXA10 基因表达的因子 | 第19-20页 |
| 1.3.4 HOXA10 调控的下游基因 | 第20-23页 |
| 1.4 HOXA10 基因的其他功能研究 | 第23-24页 |
| 1.5 转基因动物研究进展 | 第24-29页 |
| 1.5.1 转基因技术与转基因动物 | 第24-25页 |
| 1.5.2 转基因猪的应用前景及存在问题 | 第25-28页 |
| 1.5.3 转基因克隆技术在转基因猪中的应用 | 第28-29页 |
| 1.6 LncRNA的研究进展 | 第29-32页 |
| 1.6.1 LncRNA概述 | 第29-31页 |
| 1.6.2 LncRNA在家畜中的研究进展 | 第31-32页 |
| 1.6.3 LncRNA与胚胎附植 | 第32页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第32-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-62页 |
| 2.1 材料 | 第34-41页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第34页 |
| 2.1.2 细胞样品 | 第34页 |
| 2.1.3 载体及菌株 | 第34-36页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第36-37页 |
| 2.1.5 主要试剂及试剂盒 | 第37-40页 |
| 2.1.6 主要分子生物学软件及数据库 | 第40-41页 |
| 2.2 研究方法 | 第41-62页 |
| 2.2.1 本研究技术路线 | 第41-44页 |
| 2.2.2 转基因小鼠的制备与检测 | 第44-53页 |
| 2.2.3 转基因克隆公猪的传代与检测 | 第53-54页 |
| 2.2.4 转基因克隆母猪的制备 | 第54-57页 |
| 2.2.5 与HOXA10 表达相关的差异mRNA和LncRNA筛选 | 第57-62页 |
| 3 结果 | 第62-94页 |
| 3.1 转基因小鼠的制备与检测 | 第62-70页 |
| 3.1.1 制备转基因小鼠外源片段的获得 | 第62-63页 |
| 3.1.2 G0 代转基因小鼠的检测 | 第63-65页 |
| 3.1.3 转基因小鼠的传代及产仔数的观察 | 第65-67页 |
| 3.1.4 G2 代转基因小鼠Hoxa10 基因的表达检测 | 第67-70页 |
| 3.2 转基因克隆公猪的传代与检测 | 第70-77页 |
| 3.2.1 转基因猪的扩繁 | 第70页 |
| 3.2.2 转基因克隆公猪HOXA10 基因的组织表达检测 | 第70-71页 |
| 3.2.3 G0 代克隆公猪生理生化指标测定 | 第71-73页 |
| 3.2.4 转基因G1 代猪生理生化指标测定 | 第73-77页 |
| 3.3 转基因克隆母猪的制备与初步鉴定 | 第77-83页 |
| 3.3.1 胎儿成纤维细胞的性别鉴定 | 第77页 |
| 3.3.2 pc3.1-PF3-HOXA10 载体的线性化及稳转细胞的构建 | 第77-80页 |
| 3.3.3 转HOXA10 基因克隆母猪的初步鉴定 | 第80-83页 |
| 3.4 与HOXA10 表达相关的差异mRNA和LncRNA功能预测 | 第83-94页 |
| 3.4.1 pcDNA3.1(+)/HOXA10 载体构建 | 第83页 |
| 3.4.2 Ishikawa细胞的转染及表达检测 | 第83-84页 |
| 3.4.3 用于LncRNA芯片杂交的RNA质量检测 | 第84-86页 |
| 3.4.4 差异表达的mRNA和LncRNA的聚类分析 | 第86-90页 |
| 3.4.5 差异表达mRNA的Gene Ontology与KEGG通路分析 | 第90-91页 |
| 3.4.6 LncRNA的子类与亚组分析 | 第91-92页 |
| 3.4.7 可能与胚胎附植相关的LncRNA | 第92页 |
| 3.4.8 差异表达mRNA和LncRNA的Q-PCR验证 | 第92-94页 |
| 4 讨论 | 第94-102页 |
| 4.1 选择猪HOXA10 基因作为目标基因的理由 | 第94页 |
| 4.2 转基因动物制备方法的评估 | 第94-96页 |
| 4.2.1 显微注射法与体细胞核移植法的比较 | 第94-95页 |
| 4.2.2 供体细胞的选择与阳性细胞系的建立 | 第95-96页 |
| 4.2.3 胚胎移植 | 第96页 |
| 4.3 关于转基因动物的检测方法 | 第96-98页 |
| 4.3.1 转基因动物的鉴定方法 | 第96页 |
| 4.3.2 外源基因拷贝数及整合位点的检测 | 第96-97页 |
| 4.3.3 血液生理生化指标的检测 | 第97-98页 |
| 4.4 关于本研究中转基因小鼠部分的讨论 | 第98-99页 |
| 4.4.1 关于启动子的选择 | 第98-99页 |
| 4.4.2 诱导小鼠Hoxa10 基因表达及产仔数比较 | 第99页 |
| 4.5 选择LncRNA芯片进行基因功能研究的讨论 | 第99-102页 |
| 4.5.1 LncRNA的研究方法 | 第99-100页 |
| 4.5.2 LncRNA芯片结果的讨论 | 第100-102页 |
| 5 小结 | 第102-104页 |
| 5.1 本研究的主要结论 | 第102-103页 |
| 5.2 本研究的创新点与特色 | 第103页 |
| 5.3 本研究的不足与进一步工作的设想 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-121页 |
| 攻读学位期间发表论文题录 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
