| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-26页 |
| 1.1 伪狂犬病的简介 | 第14页 |
| 1.2 伪狂犬病的临床症状 | 第14-15页 |
| 1.3 伪狂犬病毒 | 第15-19页 |
| 1.3.1 伪狂犬病病毒的分类 | 第15页 |
| 1.3.2 伪狂犬病病毒的粒子结构和基因结构 | 第15-16页 |
| 1.3.3 伪狂犬病病毒编码的蛋白质和功能 | 第16-18页 |
| 1.3.4 伪狂犬病病毒的理化性质 | 第18页 |
| 1.3.5 伪狂犬病病毒的致病机理 | 第18-19页 |
| 1.4 伪狂犬病的诊断方法 | 第19-22页 |
| 1.4.1 病原学诊断技术 | 第19-20页 |
| 1.4.2 血清学诊断技术 | 第20-22页 |
| 1.5 伪狂犬病疫苗的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.5.1 传统疫苗 | 第22页 |
| 1.5.2 基因疫苗 | 第22-24页 |
| 1.6 伪狂犬病的净化方式 | 第24-25页 |
| 1.6.1 欧美伪狂犬病的净化方式 | 第24-25页 |
| 1.6.2 我国伪狂犬病的净化方式 | 第25页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第25-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-45页 |
| 2.1 主要的材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 病料、细胞、菌株、质粒和抗体 | 第26页 |
| 2.1.2 实验动物及疫苗 | 第26页 |
| 2.1.3 实验材料和试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 主要试剂的配置 | 第26-28页 |
| 2.2 主要的方法 | 第28-44页 |
| 2.2.1 病毒的分离与鉴定 | 第28-35页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建和缺失毒株的筛选 | 第35-39页 |
| 2.2.3 转移载体pBLE-gI-EGFP-gE与PRV基因组的共转染 | 第39-40页 |
| 2.2.4 重组PRV-GD2013-ΔgI/gE-EGFP病毒的筛选和纯化 | 第40页 |
| 2.2.5 转移载体 p BLE-g I-g E 与 PRV-GD2013-△g I/g E-EGFP 基因组的共转染 | 第40-41页 |
| 2.2.6 重组PRV-GD2013-ΔgI/gE病毒的筛选、纯化和验证 | 第41-42页 |
| 2.2.7 序列比对 | 第42页 |
| 2.2.8 PRV-GD2013-ΔgI/gE毒株的生长曲线 | 第42页 |
| 2.2.9 PRV-GD2013-ΔgI/gE毒株的攻毒试验 | 第42-43页 |
| 2.2.10 PRV-GD2013-ΔgI/gE毒株的免疫与攻毒 | 第43页 |
| 2.2.11 阻断ELISA和病毒中和试验 | 第43-44页 |
| 2.2.12 剖检组织病理变化 | 第44页 |
| 2.3 统计分析 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-61页 |
| 3.1 病毒的分离和鉴定结果 | 第45-50页 |
| 3.1.1 病料检测 | 第45页 |
| 3.1.2 病毒的分离 | 第45-46页 |
| 3.1.3 病毒的粒子形态 | 第46页 |
| 3.1.4 病毒的PCR与序列分析 | 第46-47页 |
| 3.1.5 进化树分析 | 第47页 |
| 3.1.6 病毒的空斑形态 | 第47-48页 |
| 3.1.7 病毒的IFA鉴定 | 第48页 |
| 3.1.8 病毒滴度的测定（TCID50）结果 | 第48-49页 |
| 3.1.9 PRV-GD2013毒株的生长曲线 | 第49页 |
| 3.1.10 PRV-GD2013毒株的攻毒试验 | 第49-50页 |
| 3.2 载体的构建 | 第50-52页 |
| 3.2.1 同源重组臂PCR扩增结果 | 第50-51页 |
| 3.2.2 Over-lap方法扩增L-E-R和L-R两条重组片段PCR结果 | 第51-52页 |
| 3.2.3 转移载体pBLE-gI-EGFP-gE和pBLE-gI-gE的鉴定结果 | 第52页 |
| 3.3 缺失毒株的筛选 | 第52-55页 |
| 3.3.1 PRV-GD2013-ΔgI/gE-EGFP的蚀斑纯化 | 第52-53页 |
| 3.3.2 PRV-GD2013-ΔgI/gE-EGFP的PCR鉴定结果 | 第53-54页 |
| 3.3.3 PRV-GD2013-ΔgI/gE的蚀斑纯化 | 第54页 |
| 3.3.4 PRV-GD2013-ΔgI/gE的PCR鉴定结果 | 第54-55页 |
| 3.3.5 PRV-GD2013-ΔgI/gE的生长曲线 | 第55页 |
| 3.4 缺失毒株的攻毒与免疫实验 | 第55-61页 |
| 3.4.1 PRV-GD2013-ΔgI/gE毒株的攻毒试验结果 | 第55-56页 |
| 3.4.2 小鼠免疫试验结果 | 第56页 |
| 3.4.3 PRV-GD2013-ΔgI/gE诱导的特异性抗体 | 第56-57页 |
| 3.4.4 PRV-GD2013-ΔgI/gE的中和试验结果 | 第57-58页 |
| 3.4.5 PRV-GD2013-ΔgI/gE免疫攻毒后的临床表现 | 第58页 |
| 3.4.6 剖检组织病理变化 | 第58-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 4.1 PRV-GD2013毒株的分离、鉴定及毒力分析 | 第61-62页 |
| 4.2 缺失毒株的构建策略 | 第62页 |
| 4.3 PRV-GD2013-ΔgI/gE缺失毒株的体外增殖分析 | 第62页 |
| 4.4 PRV-GD2013-ΔgI/gE缺失毒株的毒理和免疫性分析 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第74页 |
