| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 缩略语表 | 第6-9页 |
| 1 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 两栖类耐寒现象 | 第9页 |
| 1.2 两栖动物低温损伤 | 第9页 |
| 1.3 动物体相关耐寒机制 | 第9-10页 |
| 1.3.1 调节机制 | 第10页 |
| 1.3.2 保护机制 | 第10页 |
| 1.4 低温胁迫下抗冻保护剂的生成与调控 | 第10-13页 |
| 1.4.1 抗冻保护剂 | 第10-11页 |
| 1.4.2 葡萄糖调节相关机制 | 第11页 |
| 1.4.3 调控糖原分解关键酶 | 第11-13页 |
| 1.5 东北林蛙 | 第13-14页 |
| 1.6 本实验研究的目的意义 | 第14-15页 |
| 2 材料和方法 | 第15-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第15页 |
| 2.1.2 实验主要仪器 | 第15页 |
| 2.1.3 实验主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.4 试剂的配制 | 第16页 |
| 2.2 Real-time PCR检测PHK、PYGL、PYGM、PYGB表达变化 | 第16-23页 |
| 2.2.1 低温胁迫处理 | 第16-17页 |
| 2.2.2 东北林蛙组织采样 | 第17页 |
| 2.2.3 总RNA提取 | 第17-18页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳检测RNA提取效率 | 第18页 |
| 2.2.5 分光光度法检测RNA提取质量 | 第18页 |
| 2.2.6 cDNA合成 | 第18-19页 |
| 2.2.7 引物设计 | 第19-20页 |
| 2.2.8 引物筛选 | 第20-22页 |
| 2.2.9 Real-time PCR反应 | 第22-23页 |
| 2.3 组织PAS染色检测糖原含量变化 | 第23-25页 |
| 2.3.1 低温胁迫处理 | 第23页 |
| 2.3.2 组织取材固定 | 第23-24页 |
| 2.3.3 组织脱水和透明 | 第24页 |
| 2.3.4 组织浸蜡和包埋 | 第24页 |
| 2.3.5 组织切片 | 第24页 |
| 2.3.6 组织切片摊片烤片 | 第24页 |
| 2.3.7 组织切片PAS染色 | 第24-25页 |
| 2.4 数据处理与分析 | 第25页 |
| 2.5 本章小结 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-37页 |
| 3.1 东北林蛙肝脏和心脏总RNA提取 | 第26页 |
| 3.2 PCR扩增引物筛选结果 | 第26-27页 |
| 3.3 荧光定量标准曲线引物筛选结果 | 第27-28页 |
| 3.4 Real-time PCR退火温度优化结果 | 第28页 |
| 3.5 Real-time PCR溶解曲线 | 第28-29页 |
| 3.6 低温胁迫下东北林蛙PHK、PYGL、PYGM和PYGB表达量变化 | 第29-32页 |
| 3.6.1 东北林蛙心脏和肝脏内PHK mRNA表达量变化 | 第29-30页 |
| 3.6.2 东北林蛙PYGL在心脏和肝脏内mRNA表达量变化 | 第30-31页 |
| 3.6.3 东北林蛙PYGM在心脏和肝脏内mRNA表达量变化 | 第31-32页 |
| 3.6.4 东北林蛙PYGB在心脏和肝脏内mRNA表达量变化 | 第32页 |
| 3.7 低温胁迫下东北林蛙心肌和肝组织内糖原含量变化 | 第32-36页 |
| 3.7.1 心肌内糖原染色结果 | 第32-33页 |
| 3.7.2 心肌内糖原含量变化 | 第33-34页 |
| 3.7.3 肝组织内糖原染色结果 | 第34-35页 |
| 3.7.4 肝组织内糖原含量变化 | 第35-36页 |
| 3.8 本章小结 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-40页 |
| 4.1 低温胁迫下两栖类GP同工酶参与糖原代谢机制 | 第37-38页 |
| 4.2 低温胁迫下PHK参与糖原代谢机制 | 第38页 |
| 4.3 低温胁迫对东北林蛙体内糖原分布的影响 | 第38-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
