| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 符号说明及缩略词 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 木聚糖与木聚糖酶 | 第13-15页 |
| 1.1.1 木聚糖的组成和结构 | 第13页 |
| 1.1.2 木聚糖酶的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.3 GH11木聚糖酶 | 第14页 |
| 1.1.4 纤维堆囊菌So0157-2 Xyn11B前期研究 | 第14-15页 |
| 1.1.5 木聚糖酶的应用 | 第15页 |
| 1.2 纤维堆囊菌简介 | 第15-16页 |
| 1.3 多糖降解酶中的连接区 | 第16-20页 |
| 1.3.1 PT-rich连接区 | 第17页 |
| 1.3.2 聚丝氨酸连接区(PSL) | 第17-20页 |
| 1.4 PhosTag SDS-PAGE检测磷酸化蛋白的原理 | 第20页 |
| 1.5 毕赤酵母表达系统 | 第20-21页 |
| 1.6 本论文工作开展思路和研究内容 | 第21-23页 |
| 第二章 Xyn11B的大肠杆菌表达与性质研究 | 第23-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要实验试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-36页 |
| 2.2.1 木聚糖酶Xyn11B序列分析 | 第27-28页 |
| 2.2.2 表达载体的构建 | 第28-33页 |
| 2.2.3 目的蛋白的表达及纯化 | 第33-35页 |
| 2.2.4 目的蛋白的磷酸化检测 | 第35-36页 |
| 2.2.5 融合蛋白的GST标签切割 | 第36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-49页 |
| 2.3.1 木聚糖酶Xyn11B序列分析 | 第36-38页 |
| 2.3.2 pET-22b-Xyn11B表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.3.3 目的蛋白的诱导表达 | 第39-41页 |
| 2.3.4 目的蛋自纯化及Western检测 | 第41-42页 |
| 2.3.5 目的蛋白的磷酸化检测 | 第42-45页 |
| 2.3.6 pGEX-6P1-Xyn11B重组载体的构建 | 第45页 |
| 2.3.7 GST-Xyn11B融合蛋白的诱导表达 | 第45-46页 |
| 2.3.8 融合蛋白纯化 | 第46-47页 |
| 2.3.9 融合蛋白磷酸化状态检测 | 第47页 |
| 2.3.10 融合蛋白的PPase酶切 | 第47-49页 |
| 2.4 本章小结 | 第49-51页 |
| 第三章 Xyn11B聚丝氨酸区的截短及性质研究 | 第51-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第51页 |
| 3.1.2 培养基 | 第51页 |
| 3.1.3 主要实验试剂 | 第51-52页 |
| 3.1.4 主要仪器设备与耗材 | 第52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-55页 |
| 3.2.1 木聚糖酶Xyn11B截短体序列分析 | 第52页 |
| 3.2.2 表达载体的构建 | 第52-55页 |
| 3.2.3 目的蛋白诱导表达与纯化 | 第55页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第55-59页 |
| 3.3.1 截短表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.3.2 截短体的诱导表达 | 第56-57页 |
| 3.3.3 截短体蛋白纯化及GST标签切割 | 第57-59页 |
| 3.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 第四章 Xyn11B在毕赤酵母中的表达及性质研究 | 第60-73页 |
| 4.1 实验材料 | 第60-62页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第60页 |
| 4.1.2 培养基 | 第60-61页 |
| 4.1.3 主要实验试剂 | 第61页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第61-62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-67页 |
| 4.2.1 表达载体的构建 | 第62-64页 |
| 4.2.2 目的蛋白的表达与纯化 | 第64-67页 |
| 4.2.3 Xyn11B磷酸化检测 | 第67页 |
| 4.2.4 胞外表达Xyn11B的去糖基化 | 第67页 |
| 4.2.5 蛋白酶有限水解 | 第67页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第67-72页 |
| 4.3.1 pPIC9K-Xyn11B载体构建 | 第67-68页 |
| 4.3.2 Xyn11B诱导表达及纯化 | 第68-69页 |
| 4.3.3 PhosTag检测酸化 | 第69-70页 |
| 4.3.4 胞外表达Xyn11B的去糖基化 | 第70-71页 |
| 4.3.5 蛋白酶有限水解 | 第71-72页 |
| 4.4 本章小结 | 第72-73页 |
| 总结与展望 | 第73-75页 |
| 附录 | 第75-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附件 | 第84页 |
