| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 蜡样芽胞杆菌族概述 | 第11页 |
| 1.2 蜡样芽胞杆菌在食品中的危害 | 第11-12页 |
| 1.3 苏云金芽胞杆菌在农业上的应用 | 第12页 |
| 1.4 芽胞形成过程 | 第12-17页 |
| 1.4.1 芽胞形成的第0阶段：作出决定 | 第13-14页 |
| 1.4.2 芽胞形成的第I阶段：轴丝的形成 | 第14页 |
| 1.4.3 芽胞形成的第II阶段：不对称隔膜的形成 | 第14-15页 |
| 1.4.4 芽胞形成的第III阶段：内吞 | 第15-16页 |
| 1.4.5 芽胞形成的第IV–V阶段：皮层和胞衣的组装 | 第16页 |
| 1.4.6 芽胞形成的第VI–VII阶段：芽胞的成熟和释放阶段 | 第16-17页 |
| 1.5 细菌的信号传导 | 第17-19页 |
| 1.5.1 单组份信号系统 | 第17页 |
| 1.5.2 双组份信号系统 | 第17-19页 |
| 1.5.3 ECF sigma factor | 第19页 |
| 1.6 LytSR双组份系统的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.6.1 金黄色葡萄球菌中的LytSR双组份系统 | 第19-20页 |
| 1.6.2 表皮葡萄球菌中的LytSR双组份系统 | 第20页 |
| 1.6.3 炭疽芽胞杆菌中的LytSR双组份系统 | 第20-21页 |
| 1.7 立题依据与目的意义 | 第21-22页 |
| 1.7.1 立题依据 | 第21页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第21页 |
| 1.7.3 目的意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 常用培养基 | 第23页 |
| 2.1.3 抗生素 | 第23-24页 |
| 2.1.4 酶和其他生化试剂 | 第24页 |
| 2.1.5 溶液与缓冲液 | 第24-25页 |
| 2.2 仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.3.1 PCR模板的制备 | 第26页 |
| 2.3.2 苏云金芽胞杆菌基因组粗提取 | 第26页 |
| 2.3.3 目的片段的扩增 | 第26-28页 |
| 2.3.4 酶切反应 | 第28页 |
| 2.3.5 目的片段与载体的连接 | 第28页 |
| 2.3.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第28-29页 |
| 2.3.7 大肠杆菌（E. coli）感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.3.8 热激转化大肠杆菌（E. coli） | 第29页 |
| 2.3.9 大肠杆菌质粒的提取 | 第29页 |
| 2.3.10 Bt感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.3.11 电击转化苏云金芽胞杆菌 | 第30页 |
| 2.3.12 同源重组突变体的筛选 | 第30页 |
| 2.3.13 序列的测定和分析 | 第30页 |
| 2.3.14 生长曲线的测定 | 第30页 |
| 2.3.15 芽胞形成率的测定 | 第30-31页 |
| 2.3.16 菌体细胞自溶性分析 | 第31页 |
| 2.3.17 光学显微镜观察 | 第31页 |
| 2.3.18 激光共聚焦显微镜观察 | 第31-32页 |
| 2.3.19 蛋白的表达和纯化 | 第32页 |
| 2.3.20 凝胶阻滞实验 | 第32-33页 |
| 2.3.21 β-半乳糖苷酶活性测定 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-67页 |
| 3.1 LytSR的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 3.1.2 lytSR的结构分析 | 第34页 |
| 3.1.2 LytSR蛋白的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 3.1.3 LytSR双组份系统的分布 | 第35页 |
| 3.2 lrgAB突变体的构建 | 第35-39页 |
| 3.2.1 lrgAB基因插入突变盒的构建 | 第35-37页 |
| 3.2.2 lrgAB基因突变质粒的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.3 lrgAB基因同源重组插入突变体的筛选与验证 | 第38-39页 |
| 3.3 lytSR突变体的构建 | 第39-42页 |
| 3.4 lytSR恢复突变株构建 | 第42-43页 |
| 3.5 lytSR、lrg AB突变体表型 | 第43-50页 |
| 3.5.1 HD?lytSR、HDΔlrgAB生长曲线的测定 | 第43-44页 |
| 3.5.2 HD?lytSR、HDΔlrgAB自溶率的测定 | 第44-45页 |
| 3.5.3 HD?lytSR、HDΔlrgAB、?lytSR(lyt SR)芽胞形成率的测定 | 第45-46页 |
| 3.5.4 HD73、HD?lytSR、HDΔlrgAB、?lyt SR(lytSR)激光共聚焦显微镜观察 | 第46-50页 |
| 3.6 spoIIP/spoIID/spoIIM突变体的构建 | 第50-57页 |
| 3.6.1 spoIIP突变体的构建 | 第50-53页 |
| 3.6.2 spoIIM突变体的构建 | 第53-55页 |
| 3.6.3 spoIID突变体的构建 | 第55-57页 |
| 3.7 lrgAB受LytSR调控 | 第57-58页 |
| 3.8 lytSR与sigE及受sigE控制的spoIIP/spoIID/spoIIM的转录调控 | 第58-64页 |
| 3.8.1 lytSR受SigE控制 | 第58-60页 |
| 3.8.2 spoIIP/spoIID/spoIIM与LytSR的转录调控。 | 第60-64页 |
| 3.9 凝胶阻滞实验 | 第64-67页 |
| 3.9.1 凝胶阻滞验证Sig E对lytSR的调控 | 第64-66页 |
| 3.9.2 凝胶阻滞验证LytR对spoIIP/spoIID/spoIIM的调控 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-70页 |
| 4.1 芽胞在农业上的应用和在食品中的危害 | 第67页 |
| 4.2 参与芽胞形成过程的基因 | 第67页 |
| 4.3 LytSR影响芽胞内吞过程和细胞的自溶性 | 第67-69页 |
| 4.4 下一步展望 | 第69-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 作者简历 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
