| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-41页 |
| 1. 文昌鱼 | 第14-23页 |
| ·文昌鱼-发育及进化生物学的模式生物 | 第14-15页 |
| ·文昌鱼的分子生物学研究 | 第15-23页 |
| ·文昌鱼发育相关基因的研究概况 | 第16-21页 |
| ·文昌鱼免疫相关基因研究概况 | 第21-23页 |
| 2. 急相反应和急相蛋白 | 第23-27页 |
| 3. 转录因子 | 第27-34页 |
| ·肝细胞核转录因子 | 第29-32页 |
| ·急相反应相关转录因子 | 第32-34页 |
| 4. 血红细胞4.1蛋白(Erythrocyte membrane protein band 4.1)研究进展 | 第34-37页 |
| ·血红细胞4.1蛋白的分类 | 第34-35页 |
| ·血红细胞4.1蛋白的结构 | 第35-36页 |
| ·血红细胞4.1蛋白的研究进展 | 第36-37页 |
| 5. 本文的研究目的和技术路线 | 第37-41页 |
| 第二章 肝脏特异性基因在文昌鱼中的鉴定及表达:肝脏同源器官肝盲囊以及"肝前"时期的急相反应 | 第41-79页 |
| 1 前言 | 第41-42页 |
| 2 材料和方法 | 第42-52页 |
| ·实验材料 | 第42-44页 |
| ·文昌鱼和斑马鱼 | 第42-43页 |
| ·化学试剂 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·质粒与菌株 | 第43页 |
| ·其它相关溶液 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-52页 |
| ·序列分析以及生物信息学比对 | 第44页 |
| ·总RNA的制备及cDNA的获得 | 第44-46页 |
| ·文昌鱼肝盲囊富集候选基因EST序列的获得 | 第46-49页 |
| ·Real-time PCR检测各候选基因在肝盲囊和去肝盲囊组织的表达情况 | 第49-51页 |
| ·Real-time PCR检测文昌鱼肝盲囊特异性表达基因和对应的斑马鱼肝脏特异性表达同源基因在LPS诱导的急相反应中的表达情况 | 第51页 |
| ·搜索转录因子在各基因的DNA序列中可能的结合位点 | 第51-52页 |
| 3 结果 | 第52-77页 |
| ·生物信息学分析获得候选基因 | 第52-55页 |
| ·文昌鱼总RNA的提取及cDNA的获得 | 第55页 |
| ·各候选基因EST序列的扩增 | 第55页 |
| ·各候选基因在文昌鱼肝盲囊的表达情况 | 第55-63页 |
| ·文昌鱼肝盲囊和去肝盲囊组织总RNA的制备 | 第55-56页 |
| ·cDNA的获得及质量检测 | 第56-60页 |
| ·引物特异性和扩增效率检测 | 第60页 |
| ·Real-time PCR检测各候选基因在文昌鱼肝盲囊和去肝盲囊组织中的表达 | 第60-63页 |
| ·肝盲囊特异性表达基因在LPS诱导的急相反应中的表达情况 | 第63-67页 |
| ·各样品总RNA的提取及cDNA的获得 | 第63页 |
| ·引物特异性和扩增效率检测 | 第63页 |
| ·Real-time PCR分析 | 第63-67页 |
| ·HNFs在文昌鱼肝盲囊特异性基因启动子区域的假定结合位点 | 第67-73页 |
| ·急相反应相关基因的转录因子假定结合位点研究 | 第73-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| 第三章 文昌鱼4.1蛋白基因的鉴定、表达及进化分析 | 第79-112页 |
| 1. 前言 | 第79-80页 |
| 2 材料和方法 | 第80-93页 |
| ·实验材料 | 第80-81页 |
| ·文昌鱼 | 第80页 |
| ·试剂 | 第80页 |
| ·实验仪器 | 第80页 |
| ·质粒与菌株 | 第80页 |
| ·实验相关溶液 | 第80-81页 |
| ·实验方法 | 第81-93页 |
| ·总RNA的制备及cDNA的获得 | 第81页 |
| ·文昌鱼BbP41基因开放阅读框的获得 | 第81-83页 |
| ·Northern blot | 第83-86页 |
| ·Real-time PCR检测文昌鱼protein 4.1在不同组织的表达情况 | 第86-87页 |
| ·重组BbP41的表达和纯化 | 第87-91页 |
| ·重组His-BbP41融合蛋白的Western blot检测 | 第91页 |
| ·重组His-BbP41融合蛋白与肌动蛋白(actin)和血影蛋白(spectrin) 的结合 | 第91-93页 |
| 3 结果 | 第93-109页 |
| ·文昌鱼BbP41基因ORF片段的获得与序列分析 | 第93-100页 |
| ·青岛文昌鱼BbP41蛋白的进化分析 | 第100-101页 |
| ·文昌鱼BbP41基因在基因组DNA中的存在情况及分析 | 第101-102页 |
| ·文昌鱼BbP41基因Northern杂交 | 第102-104页 |
| ·文昌鱼总RNA的提取 | 第102页 |
| ·文昌鱼Bbp41基因cDNA探针的合成和标记效率检测 | 第102-103页 |
| ·Northern杂交 | 第103-104页 |
| ·实时定量检测文昌鱼BbP41在各组织的表达量 | 第104-105页 |
| ·pET-28-BbP41表达载体的构建 | 第105-106页 |
| ·重组质粒pET-28-BbP41在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第106页 |
| ·BbP41蛋白的Western blot检测 | 第106-107页 |
| ·His-BbP41蛋白与肌动蛋白和血影蛋白的结合实验 | 第107-109页 |
| 4 讨论 | 第109-112页 |
| 结论 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 作者简历 | 第127-128页 |
| 博士研究生期间发表的学术论文 | 第128页 |
