| 缩写词 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 第一章 引言 | 第18-26页 |
| 1 植物小分子RNA研究进展 | 第18-21页 |
| 1.1 植物miRNA及其生物学功能 | 第18-20页 |
| 1.2 植物体胚发生过程中miRNA的研究进展 | 第20页 |
| 1.3 植物ta-siRNA及其生物学功能 | 第20-21页 |
| 2 植物生长素响应基因家族研究进展 | 第21-22页 |
| 2.1 植物生长素响应因子的特征 | 第21-22页 |
| 2.2 植物生长素响应基因克隆与表达研究 | 第22页 |
| 3 植物miRNA及TAS3与其靶基因生长素响应因子的功能研究 | 第22-24页 |
| 3.1 植物miR160、miR167、miR390、TAS3及其靶基因生长素响应因子的互作机制 | 第22-23页 |
| 3.2 Micro-Tom番茄遗传转化研究进展 | 第23-24页 |
| 4 本研究的意义和主要内容 | 第24-26页 |
| 4.1 本项目研究的意义 | 第24-25页 |
| 4.2 本项目的研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 龙眼体胚miR160、miR167、miR390与TAS3初级体克隆及生物信息学分析 | 第26-42页 |
| 第一节 龙眼体胚miR160、miR167、miR390与TAS3初级体克隆 | 第26-31页 |
| 1 材料与方法 | 第26-29页 |
| 1.1 材料 | 第26页 |
| 1.2 方法 | 第26-29页 |
| 1.2.1 龙眼体胚不同发育时期的培养材料总RNA提取及cDNA合成 | 第26-27页 |
| 1.2.2 龙眼体胚pri-miR160、pri-miR167、pri-miR390与pri-TAS3克隆的引物设计及PCR扩增 | 第27-29页 |
| 1.2.3 目的基因克隆的PCR反应体系及扩增程序 | 第29页 |
| 1.2.4 目的片段的回收、克隆和测序 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-30页 |
| 2.1 龙眼体胚miR160、miR167、miR390与TAS3基因初级体保守序列的扩增 | 第29-30页 |
| 2.2 龙眼体胚miR160、miR167、miR390与TAS3基因初级体cDNA末端的RACE扩增 | 第30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| 3.1 龙眼体胚miR160、miR167、miR390、TAS3初级体序列克隆存在的问题及意义 | 第30-31页 |
| 第二节 龙眼胚性愈伤组织pri-miR160、pri-miR167、pri-miR390与pri-TAS3生物信息学分析 | 第31-42页 |
| 1 材料与方法 | 第31-32页 |
| 1.1 材料 | 第31页 |
| 1.2 方法 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-41页 |
| 2.1 龙眼体胚pri-miR160、pri-miR167、pri-miR390与pri-TAS3二级结构及成熟序列的预测与分析 | 第32-38页 |
| 2.1.1 龙眼体胚pri-miR160二级结构及成熟序列的预测与分析 | 第32-34页 |
| 2.1.2 龙眼体胚pri-miR167二级结构及成熟序列的预测与分析 | 第34-35页 |
| 2.1.3 龙眼体胚pri-miR390二级结构及成熟序列的预测与分析 | 第35-36页 |
| 2.1.4 龙眼体胚pri-TAS3二级结构及成熟序列的预测与分析 | 第36-38页 |
| 2.2 龙眼体胚pri-miR160、pri-miR167、pri-miR390与pri-TAS3的同源性分析 | 第38-41页 |
| 2.2.1 龙眼体胚pri-miR160的同源性分析 | 第38页 |
| 2.2.2 龙眼体胚pri-miR167的同源性分析 | 第38-39页 |
| 2.2.3 龙眼体胚pri-miR390的同源性分析 | 第39-40页 |
| 2.2.4 龙眼体胚pri-TAS3的同源性分析 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 龙眼胚性愈伤组织靶基因ARFs的克隆及生物信息学分析 | 第42-53页 |
| 第一节 龙眼胚性愈伤组织靶基因ARFs的克隆 | 第42-46页 |
| 1 材料与方法 | 第42-44页 |
| 1.1 材料 | 第42页 |
| 1.2 方法 | 第42-44页 |
| 1.2.1 龙眼胚性愈伤组织、球形胚和鱼雷形胚总RNA提取和cDNA的合成 | 第42页 |
| 1.2.2 龙眼胚性愈伤组织ARFs基因的引物设计及PCR扩增 | 第42-43页 |
| 1.2.3 龙眼胚性愈伤组织ARF基因家族PCR扩增反应体系和程序 | 第43-44页 |
| 1.2.4 目的片段的回收、克隆和测序 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-46页 |
| 2.1 龙眼胚性愈伤组织ARFs基因保守区序列的获得 | 第44页 |
| 2.2 龙眼生长素响应因子ARFs基因cDNA末端的RACE扩增 | 第44-45页 |
| 2.3 龙眼生长素响应因子ARFs基因的核苷酸序列分析 | 第45-46页 |
| 第二节 龙眼生长素响应因子ARF3、ARF4、ARF6、ARF8、ARF10、ARF16和ARF17的生物信息学分析 | 第46-53页 |
| 1 材料与方法 | 第46页 |
| 1.1 材料 | 第46页 |
| 1.2 方法 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-51页 |
| 2.1 龙眼胚性愈伤组织生长素响应蛋白ARFs理化性质与保守结构域的预测与分析 | 第46-47页 |
| 2.2 龙眼胚性愈伤组织生长素响应蛋白ARFs磷酸化位点的预测与分析 | 第47-48页 |
| 2.3 龙眼胚性愈伤组织生长素响应蛋白ARFs二级及三维结构的预测与分析 | 第48-49页 |
| 2.4 龙眼胚性愈伤组织生长素响应蛋白ARFs的亚细胞定位和信号肽预测分析 | 第49页 |
| 2.5 龙眼胚性愈伤组织ARFs蛋白质的跨膜结构预测与分析 | 第49-50页 |
| 2.6 龙眼胚性愈伤组织生长素响应蛋白ARF3、ARF6、ARF8、ARF10、ARF16和ARF17与拟南芥ARF蛋白家族的的系统进化树分析 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 龙眼生长素响应因子ARFs及TAS3基因的裂解位点验证 | 第53-59页 |
| 1 材料与方法 | 第53-54页 |
| 1.1 材料 | 第53页 |
| 1.2 方法 | 第53-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-57页 |
| 2.1 龙眼TAS3基因及其靶基因ARF3、ARF4的裂解位点验证 | 第54-55页 |
| 2.2 龙眼miR167靶基因ARF6、ARF8的裂解位点验证 | 第55-56页 |
| 2.3 龙眼miR160靶基因ARF10、ARF16、ARF17的裂解位点验证 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 龙眼体胚发生过程中小分子RNA及其靶基因ARFs的定量表达分析 | 第59-76页 |
| 1 材料与方法 | 第59-61页 |
| 1.1 材料 | 第59-60页 |
| 1.2 方法 | 第60-61页 |
| 1.2.1 不同浓度2,4-D处理龙眼胚性愈伤组织 | 第60页 |
| 1.2.2 总RNA的提取和cDNA的合成 | 第60页 |
| 1.2.3 实时荧光定量PCR | 第60-61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-72页 |
| 2.1 龙眼体胚发生过程中小分子RNA及其靶基因ARFs在龙眼体细胞胚胎不同发育阶段的qPCR分析 | 第61-65页 |
| 2.1.1 龙眼TAS3基因及其靶基因ARF3、ARF4在龙眼体细胞胚胎不同发育阶段的表达分析 | 第62页 |
| 2.1.2 龙眼miR167初级体及其靶基因ARF6、ARF8在龙眼体细胞胚胎不同发育阶段的表达分析 | 第62-63页 |
| 2.1.3 龙眼miR160初级体及其靶基因ARF1O、ARF16、ARF17在龙眼体细胞胚胎不同发育阶段的表达分析 | 第63-64页 |
| 2.1.4 龙眼miR390初级体及其靶基因TAS3在龙眼体细胞胚胎不同发育阶段的表达分析 | 第64-65页 |
| 2.2 龙眼小分子RNA及其靶基因ARFs在龙眼“四季蜜”不同组织部位的qPCR分析 | 第65-69页 |
| 2.2.1 龙眼TAS3基因及其靶基因ARF3、ARF4在龙眼“四季蜜”不同组织部位的表达分析 | 第65-66页 |
| 2.2.2 龙眼miR167初级体及其靶基因ARF6、ARF8在龙眼“四季蜜”不同组织部位的表达分析 | 第66-67页 |
| 2.2.3 龙眼miR160初级体及其靶基因ARF10、ARF16、ARF17在龙眼“四季蜜”不同组织部位的表达分析 | 第67-68页 |
| 2.2.4 龙眼miR390初级体及其靶基因TAS3在龙眼“四季蜜”不同组织部位的表达分析 | 第68-69页 |
| 2.3 龙眼小分子RNA及其靶基因ARFs在2,4-D处理下龙眼胚性愈伤组织中的qPCR分析 | 第69-72页 |
| 2.3.1 龙眼TAS3基因及其靶基因ARF3、ARF4在2,4-D处理下龙眼胚性愈伤组织中的表达分析 | 第69页 |
| 2.3.2 龙眼miR167初级体及其靶基因ARF6、ARF8在2,4-D处理下龙眼胚性愈伤组织中的表达分析 | 第69-70页 |
| 2.3.3 龙眼miR1 60初级体及其靶基因ARF10、ARF16、ARF17在2,4-D处理下龙眼胚性愈伤组织中的表达分析 | 第70-71页 |
| 2.3.4 龙眼miR390初级体及其靶基因TAS3在2,4-D处理下龙眼胚性愈伤组织中的表达分析 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-76页 |
| 3.1 龙眼miR160、miR167、miR390、TAS3初级体及其靶基因ARFs的互作机制介导龙眼体胚的发生 | 第72-73页 |
| 3.2 龙眼miR160、miR167、miR390、TAS3初级体及其靶基因ARFs在龙眼“四季蜜”不同组织的特异性表达 | 第73-74页 |
| 3.3 不同浓度2,4-D处理下龙眼miR160、miR167、miR390、TAS3初级体及其靶基因ARFs的表达差异 | 第74-76页 |
| 第六章 龙眼TAS3基因转化Micro-Tom番茄的研究 | 第76-85页 |
| 1 材料与方法 | 第76-78页 |
| 1.1 材料 | 第76-77页 |
| 1.1.1 试验材料 | 第76页 |
| 1.1.2 培养基组分 | 第76页 |
| 1.1.3 试验试剂 | 第76-77页 |
| 1.2 方法 | 第77-78页 |
| 1.2.1 龙眼TAS3基因超表达载体的构建 | 第77页 |
| 1.2.2 农杆菌介导的龙眼TAS3表达载体的转化 | 第77页 |
| 1.2.3 根癌农杆菌转化番茄子叶 | 第77-78页 |
| 1.2.4 转基因植株的检测 | 第78页 |
| 1.2.5 检测TAS3、miR390、ARF3和ARF4在转基因番茄中的表达情况 | 第78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-83页 |
| 2.1 构建植物表达载体及重组质粒的鉴定 | 第78-79页 |
| 2.2 检测转基因植株 | 第79-80页 |
| 2.3 T_0代转基因植物的表型 | 第80-81页 |
| 2.4 转基因番茄定量表达分析 | 第81-83页 |
| 2.4.1 检测分析TAS3、miR390在转基因番茄中的表达情况 | 第81-82页 |
| 2.4.2 检测分析ARF3在转基因番茄中的表达情况 | 第82页 |
| 2.4.3 检测分析ARF4在转基因番茄中的表达情况 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| 3.1 过表达龙眼TAS3基因影响植物根部、茎干及叶片的生长 | 第83页 |
| 3.2 龙眼TAS3、miR390和ARFs三者之间的互作机制研究 | 第83-85页 |
| 第七章 小结 | 第85-90页 |
| 1 龙眼体胚miR160、miR167、miR390与TAS3初级体克隆及生物信息学分析 | 第85页 |
| 2 龙眼胚性愈伤组织靶基因ARF3、ARF4、ARF6、ARF8、ARF10、ARF16、ARF17的克隆及生物信息学分析 | 第85-86页 |
| 3 龙眼TAS3、ARF3、ARF4、ARF6、ARF8、ARF1O、ARF16、ARF17的裂解位点验证 | 第86-87页 |
| 4 龙眼体胚miR160、miR167、miR390与TAS3初级体及其靶基因ARFs的定量表达分析 | 第87页 |
| 5 龙眼TAS3基因超表达研究及其与miR390、ARFs三者间的互作机制研究 | 第87-90页 |
| 参考文献 | 第90-96页 |
| 附录 | 第96-110页 |
| 附录1 GenBank上登录的龙眼miR160、miR167、miR390与TAS3初级体及其靶基因的序列信息(12条) | 第96-109页 |
| 附录2 转基因植株表型图 | 第109-110页 |
| 在学硕士期间发表学术论文情况 | 第110-111页 |
| 一、在学期间发表论文 | 第110页 |
| 二、在学期间参加的学术会议 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
