| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第10-23页 |
| 1 麻风树核糖体失活蛋白curcin国内外研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1 麻风树核糖体失活蛋白curcin概述 | 第10页 |
| 1.2 麻风树核糖体失活蛋白curcin的生物学活性及应用 | 第10页 |
| 1.3 麻风树核糖体失活蛋白curcin的基因克隆和表达 | 第10-11页 |
| 1.4 麻风树核糖体失活蛋白curcin的作用肿瘤细胞的靶向性研究 | 第11页 |
| 2 类弹性蛋白标签表达系统在蛋白表达纯化中的应用 | 第11-16页 |
| 2.1 类弹性蛋白的概述 | 第11-14页 |
| 2.2 类弹性蛋白在蛋白纯化中的应用 | 第14-16页 |
| 3 大肠杆菌中重组蛋白可溶性表达 | 第16-20页 |
| 3.1 融合表达 | 第16-18页 |
| 3.2 表达条件优化 | 第18-19页 |
| 3.3 表达菌株的选择 | 第19-20页 |
| 4 课题思路 | 第20-21页 |
| 5 技术路线 | 第21-23页 |
| 第二章 三种融合表达方法对curcin-TfRBP9可溶性表达的影响 | 第23-49页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-38页 |
| 2.1 ELP-Intein介导curcin-TfRBP9可溶性表达和分离纯化 | 第24-32页 |
| 2.1.1 基因的设计、扩增与克隆 | 第24-30页 |
| 2.1.2 重组蛋白的表达 | 第30-32页 |
| 2.2 SUMO融合标签对curcin-TfRBP9基因可溶性表达的应用 | 第32-36页 |
| 2.2.1 基因的设计、扩增与克隆 | 第32-36页 |
| 2.2.2 重组蛋白sumo-curcin-TfRBP9诱导表达的可溶性分析 | 第36页 |
| 2.3 GST与SUMO标签联合应用于curcin-TfRBP9融合蛋白的可溶性表达 | 第36-38页 |
| 2.3.1 基因的设计、扩增与克隆 | 第36-37页 |
| 2.3.2 融合蛋白GST- sumo-curcin、GST-sumo-curcin-TfRBP9的表达及可溶性分析 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-49页 |
| 3.1 应用ELP-Intein表达系统于curcin-TfRBP9基因促可溶性表达分析 | 第38-40页 |
| 3.1.1 目的基因的获取 | 第38页 |
| 3.1.2 菌落PCR鉴定阳性重组子 | 第38-39页 |
| 3.1.3 重组质粒的测序鉴定 | 第39页 |
| 3.1.4 融合蛋白表达鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2 SUMO标签对curcin-TfRBP9基因促可溶性表达分析 | 第40-43页 |
| 3.2.1 PCR扩增sumo-curcin、sumo-curcin-TfRBP9片段 | 第40-41页 |
| 3.2.2 菌落PCR鉴定pQE30sumocurcin、pQE30sumo-curcin-TfRBP9重组转化子 | 第41-42页 |
| 3.2.3 阳性重组子的诱导表达鉴定 | 第42页 |
| 3.2.4 重组质粒pQE30sumo-curcin-TfRBP9和pQE30sumo-curcin测序 | 第42-43页 |
| 3.2.5 重组菌株M15 pQE30sumo-curcin-TfRBP9的可溶性表达分析 | 第43页 |
| 3.3 GST和SUMO标签联用对curcin-TfRBP9基因促可溶性表达分析 | 第43-49页 |
| 3.3.1 PCR扩增GST、sumo-curcin、sumo-curcin-TfRBP9片段 | 第43-44页 |
| 3.3.2 pQE30GST和pMD18T-sumo-curcin、pMD18T- sumo-curcin-TfRBP9重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.3 重组质粒pQE30GST和pMD18T-sumo-curcin、pMD18T- sumo-curcin-Tf RBP9的测序 | 第45-46页 |
| 3.3.4 重组质粒pQE30GST-sumo-curcin-TfRBP9菌落PCR初步鉴定 | 第46页 |
| 3.3.5 重组质粒pQE30GST-sumo-curcin-TfRBP9的诱导表达筛选 | 第46-47页 |
| 3.3.6 重组质粒pQE30GST-sumo-curcin、pQE30GST-sumo-curcin-TfRBP9的测序 | 第47页 |
| 3.3.7 重组菌株M15 pQE30GST-sumo-curcin-TfRBP9的可溶性表达分析 | 第47-49页 |
| 第三章 融合蛋白GST-sumo-curcin-TfRBP9的表达条件优化及重组蛋白curcin-TfRBP9的纯化与鉴定 | 第49-62页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-52页 |
| 2.1 融合蛋白GST-sumo-curcin-TfRBP9表达菌株的筛选 | 第49-50页 |
| 2.2 融合蛋白表达条件的优化 | 第50页 |
| 2.3 融合蛋白curcin-TfRBP9和curcin的分离、纯化及鉴定 | 第50-52页 |
| 3 实验结果 | 第52-62页 |
| 3.1 表达菌株的筛选 | 第52-53页 |
| 3.2 重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第53-60页 |
| 3.3 融合蛋白的纯化与鉴定 | 第60页 |
| 3.4 融合蛋白curcin-TfRBP9的收获与鉴定 | 第60-62页 |
| 第四章 可溶性表达的curcin-TfRBP9的生物学活性检测 | 第62-65页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第62-63页 |
| 2 实验方法 | 第63页 |
| 2.1 流式细胞术检测A549细胞膜表面转铁蛋白受体（TfR）表达 | 第63页 |
| 2.2 MTT检测融合蛋白curcin-TfRBP9对肿瘤细胞毒性作用 | 第63页 |
| 3 实验结果 | 第63-65页 |
| 3.1 A549细胞膜表面转铁蛋白受体（TfR）表达 | 第63-64页 |
| 3.2 MTT检测curcin-TfRBP9融合蛋白对肿瘤细胞的毒性作用 | 第64-65页 |
| 第五章 讨论 | 第65-68页 |
| 1 表达载体pET-ELP-Intein-curcin-TfRBP9、pQE30sumo-curcin-TfRBP9、pQE30GST-sumo-curcin-TfRBP9的构建及融合蛋白的可溶性表达 | 第65-66页 |
| 2 融合蛋白GST-sumo-curcin-TfRBP9的诱导表达条件优化 | 第66页 |
| 3 融合蛋白GST-sumo-curcin-TfRBP9的纯化及curcin-TfRBP9蛋白的获得 | 第66-67页 |
| 4 融合蛋白的SUMO特异性酶消化及curcin-TfRBP9蛋白的获得 | 第67页 |
| 5 curcin-TfRBP9蛋白的体外抗肿瘤活性的测定 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 附录 | 第75-82页 |
| 英文缩略词表 | 第82-83页 |
| 功硕期间发表论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
