| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要符号对照表 | 第9-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-26页 |
| 1.1 聚羟基脂肪酸酯概述 | 第10-15页 |
| 1.1.1 PHA简介 | 第10页 |
| 1.1.2 PHA结构及分类 | 第10-12页 |
| 1.1.3 PHA的材料学性能 | 第12-14页 |
| 1.1.4 PHA的应用 | 第14-15页 |
| 1.2 聚羟基脂肪酸酯的生物合成途径及主要酶 | 第15-19页 |
| 1.2.1 PHA主要生物合成途径 | 第15-16页 |
| 1.2.2 PHA聚合酶（PhaC） | 第16-17页 |
| 1.2.3 PHA代谢相关基因 | 第17-19页 |
| 1.3 PHB的发酵生产 | 第19-21页 |
| 1.3.1 利用野生型菌株生产PHB | 第19-21页 |
| 1.3.2 利用重组E.coli生产PHB | 第21页 |
| 1.4 PHA的低成本生产策略 | 第21-22页 |
| 1.5 PHB的微氧合成 | 第22-24页 |
| 1.5.1 氧气对PHB合成的影响 | 第22-23页 |
| 1.5.2 E. coli微氧代谢及调控系统 | 第23-24页 |
| 1.5.3 E. coliPHB的微氧合成 | 第24页 |
| 1.6 本论文的主要工作及意义 | 第24-26页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第26-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-30页 |
| 2.1.1 菌种 | 第26-27页 |
| 2.1.2 质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.3 常用分子生物学试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.4 常用生物化学试剂 | 第29页 |
| 2.1.5 DNA分子量标准 | 第29-30页 |
| 2.2 实验常用仪器及设备 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-39页 |
| 2.3.1 常用培养基及抗生素的配制 | 第31页 |
| 2.3.2 分子生物学实验方法 | 第31-36页 |
| 2.3.3 菌种的保存 | 第36页 |
| 2.3.4 摇瓶和发酵罐培养 | 第36-37页 |
| 2.3.5 理化分析方法 | 第37-39页 |
| 第3章 利用微氧启动子提高菌株PHB微氧合成量 | 第39-47页 |
| 3.1 本章导读 | 第39-40页 |
| 3.2 微氧启动子的分析与确定 | 第40页 |
| 3.2.1 大肠杆菌转录组分析 | 第40页 |
| 3.2.2 确定11个微氧启动子序列 | 第40页 |
| 3.3 质粒与重组菌的构建 | 第40-45页 |
| 3.3.1 扩增11个大肠杆菌微氧启动子 | 第40-42页 |
| 3.3.2 构建微氧启动子调控rfp基因表达的质粒 | 第42页 |
| 3.3.3 微氧启动子对RFP荧光强度的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.4 构建微氧启动子调控phaCAB表达的质粒 | 第43-44页 |
| 3.3.5 微氧启动子对PHB合成的影响 | 第44-45页 |
| 3.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第4章 利用串联vgb启动子（P_(nvgb)）提高PHB微氧合成量 | 第47-54页 |
| 4.1 本章导读 | 第47页 |
| 4.2 串联vgb启动子（P_(nvgb)）的构建 | 第47-49页 |
| 4.3 利用串联vgb启动子（P_(nvgb)）提高PHB微氧合成量 | 第49-50页 |
| 4.3.1 构建串联vgb启动子（P_(nvgb)）调控下的phaCAB表达质粒 | 第49页 |
| 4.3.2 串联vgb启动子（P_(nvgb)）对PHB微氧合成量的影响 | 第49-50页 |
| 4.4 串联vgb启动子（P_(nvgb)）调控下phaC的转录水平 | 第50-52页 |
| 4.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 第5章 E.coli菌株对PHB微氧合成量的影响 | 第54-58页 |
| 5.1 本章导读 | 第54页 |
| 5.2 E.coli菌株的选择 | 第54-55页 |
| 5.2.1 确定6种待筛选E. coli菌株 | 第54-55页 |
| 5.2.2 不同菌株对PHB含量的影响 | 第55页 |
| 5.3 敲除arcA基因对细胞干重和PHB含量的影响 | 第55-57页 |
| 5.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第6章 利用P_(8vgb)提高Halomonas sp.LS21菌株PHB微氧合成量 | 第58-68页 |
| 6.1 本章导读 | 第58-59页 |
| 6.2 异源表达VHb蛋白对菌株PHB微氧合成量的影响 | 第59-61页 |
| 6.2.1 构建P_(vgb)、P_(8vgb)调控下的VHb蛋白表达质粒 | 第59-60页 |
| 6.2.2 异源表达VHb蛋白对PHB合成量的影响 | 第60-61页 |
| 6.3 过表达phaCAB_(LS21)基因簇对菌株PHB合成量的影响 | 第61-63页 |
| 6.3.1 构建P_(8vgb)调控下的phaCAB_(LS21)基因簇过表达质粒 | 第61-62页 |
| 6.3.2 过表达phaCAB_(LS21)对菌株PHB合成量的影响 | 第62-63页 |
| 6.4 共表达VHb蛋白和phaCAB_(LS21)对菌株PHB微氧合成量的影响 | 第63-65页 |
| 6.4.1 构建P_(8vgb)调控下的VHb蛋白和phaCAB_(LS21)基因簇共表达质粒 | 第63-64页 |
| 6.4.2 共表达VHb蛋白和phaCAB_(LS21)对菌株PHB积累量的影响 | 第64-65页 |
| 6.5 共表达VHb蛋白和phaCAB_(LS21)菌株的发酵罐实验 | 第65-66页 |
| 6.6 本章小结 | 第66-68页 |
| 第7章讨论与展望 | 第68-73页 |
| 7.1 论文工作总结与讨论 | 第68-69页 |
| 7.2 工作展望 | 第69-73页 |
| 7.2.1 利用合成生物学方法构建功能模块 | 第69-70页 |
| 7.2.2 不依赖抗生素的表达系统 | 第70-71页 |
| 7.2.3 开发生产PHA的平台菌株 | 第71页 |
| 7.2.4 开发PHA的高附加值应用 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 附录A 11个微氧启动子序列 | 第83-85页 |
| 附录B 串联vgb启动子（P_(nvgb)）序列 | 第85-88页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第88页 |
