| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 综述 | 第10-14页 |
| 1.1 骨质疏松现状以及治疗药物 | 第10-11页 |
| 1.1.1 骨质疏松及其分类 | 第10页 |
| 1.1.2 骨质疏松的危害以及现状 | 第10页 |
| 1.1.3 骨质疏松的治疗及药物 | 第10-11页 |
| 1.2 甲状旁腺激素综述 | 第11-13页 |
| 1.2.1 基因结构 | 第11页 |
| 1.2.2 生理功能作用机制 | 第11-12页 |
| 1.2.3 国内外研究进展及临床展望 | 第12-13页 |
| 1.3 本文研究的主要内容以及意义 | 第13-14页 |
| 1.3.1 本文研究的主要内容 | 第13-14页 |
| 1.3.2 本文研究意义 | 第14页 |
| 第2章 重组蛋白PTH表达及纯化的整体设计 | 第14-20页 |
| 2.1 绪论 | 第14-15页 |
| 2.2 原核表达宿主的选择 | 第15页 |
| 2.3 表达载体的选择 | 第15-16页 |
| 2.4 引物设计和PTH基因的扩增 | 第16-17页 |
| 2.5 大肠杆菌表达系统的构成 | 第17页 |
| 2.6 外源基因的整合与转化 | 第17页 |
| 2.7 纯化方法的选择与组合 | 第17-19页 |
| 2.8 重组蛋白的检验与鉴定 | 第19-20页 |
| 第3章 PTH重组蛋白的原核表达 | 第20-26页 |
| 3.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 3.1.1 质粒与菌种 | 第20-22页 |
| 3.1.2 工具酶及主要试剂 | 第22页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 3.2 方法 | 第22-24页 |
| 3.2.1 PET32a-PTH1-84融合型重组表达质粒的构建 | 第22页 |
| 3.2.2 双酶切 | 第22-23页 |
| 3.2.3 目的基因与表达质粒连接 | 第23页 |
| 3.2.4 感受态细胞的制备与转化 | 第23页 |
| 3.2.5 挑选阳性克隆 | 第23-24页 |
| 3.2.6 重组子鉴定及测序 | 第24页 |
| 3.2.7 PTH1-84在大肠杆菌中的表达 | 第24页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第24-26页 |
| 3.3.1 重组质粒的构建、目的片段转化及测序结果 | 第24-25页 |
| 3.3.2 蛋白表达及条件优化结果 | 第25-26页 |
| 3.4 小结 | 第26页 |
| 第4章 重组蛋白PTH的分离纯化 | 第26-36页 |
| 4.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 4.1.1 试剂和材料 | 第26-27页 |
| 4.1.2 仪器 | 第27页 |
| 4.2 方法 | 第27-30页 |
| 4.2.1 菌体破碎 | 第27页 |
| 4.2.2 亲和层析 | 第27页 |
| 4.2.3 酶切 | 第27-28页 |
| 4.2.4 亲和层析 | 第28页 |
| 4.2.5 SP强阳离子交换层析 | 第28-29页 |
| 4.2.6 反相层析source 15rpc | 第29页 |
| 4.2.7 重组蛋白的纯度分析 | 第29页 |
| 4.2.8 生物活性测定 | 第29-30页 |
| 4.3 实验结果与讨论： | 第30-35页 |
| 4.3.1 菌体破碎及亲和层析结果 | 第30-31页 |
| 4.3.2 肠激酶酶切结果 | 第31-32页 |
| 4.3.3 亲和层析去his-tag标签结果 | 第32页 |
| 4.3.4 SP强阳离子交换层析及source 15rpc反相层析结果 | 第32-34页 |
| 4.3.5 重组蛋白的纯度分析结果 | 第34页 |
| 4.3.6 生物学活性测定结果 | 第34-35页 |
| 4.4 小结 | 第35-36页 |
| 结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-40页 |
| 致谢 | 第40页 |
