| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-39页 |
| 1.1 植物应对各种胁迫反应机制 | 第16-22页 |
| 1.1.1 植物免疫反应 | 第16-17页 |
| 1.1.2 植物抗旱机制 | 第17-19页 |
| 1.1.3 植物抗盐机制 | 第19-22页 |
| 1.2 WRKY转录因子 | 第22-27页 |
| 1.2.1 WRKY转录因子的结构特点和分类 | 第22-24页 |
| 1.2.2 WRKY结构域和W-box | 第24-26页 |
| 1.2.3 WRKY转录因子的起源和进化 | 第26-27页 |
| 1.3 WRKY转录因子的功能 | 第27-36页 |
| 1.3.1 WRKY转录因子参与防御反应 | 第27-29页 |
| 1.3.2 WRKY转录因子参与非生物胁迫 | 第29-31页 |
| 1.3.3 WRKY转录因子参与植物生长发育 | 第31-34页 |
| 1.3.4 WRKY转录因子在磷缺乏胁迫中的作用 | 第34-35页 |
| 1.3.5 WRKY转录因子参与植物代谢 | 第35-36页 |
| 1.4 WRKY转录因子功能发挥的机理研究 | 第36-37页 |
| 1.5 本实验的目的意义 | 第37-39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-64页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第39页 |
| 2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第39页 |
| 2.1.4 序列测定 | 第39页 |
| 2.1.5 引物 | 第39-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-64页 |
| 2.2.1 棉花的培养与处理 | 第41-42页 |
| 2.2.2 烟草的培养与处理 | 第42-43页 |
| 2.2.3 植物总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.2.3.1 利用Trizol Kit提取烟草叶片总RNA | 第43页 |
| 2.2.3.2 利用CTAB法提取总RNA | 第43-44页 |
| 2.2.4 RNA的纯化 | 第44-45页 |
| 2.2.4.1 RNA中基因组DNA的去除 | 第44页 |
| 2.2.4.2 琼脂糖变性凝胶电泳检测RNA质量 | 第44-45页 |
| 2.2.5 cDNA第一链的合成 | 第45页 |
| 2.2.6 cDNA纯化（用于 5' RACE） | 第45-46页 |
| 2.2.7 cDNA的末端加尾反应（用于 5' RACE） | 第46页 |
| 2.2.8 PCR扩增片段的回收 | 第46页 |
| 2.2.9 目的片段与克隆载体的连接 | 第46-47页 |
| 2.2.10 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第47-48页 |
| 2.2.10.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
| 2.2.10.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第47-48页 |
| 2.2.11 质粒DNA的提取 | 第48-49页 |
| 2.2.11.1 大量法提取质粒DNA | 第48-49页 |
| 2.2.11.2 试剂盒小量提取质粒DNA | 第49页 |
| 2.2.12 重组质粒的酶切鉴定 | 第49页 |
| 2.2.13 GhWRKY25 cDNA全长序列的获得 | 第49-53页 |
| 2.2.13.1 利用简并引物进行PCR扩增以获得中间片段 | 第49-50页 |
| 2.2.13.2 5'RACE获取 5'末端序列 | 第50-51页 |
| 2.2.13.3 3'RACE获取 3'末端序列 | 第51-52页 |
| 2.2.13.4 cDNA全长序列的获取 | 第52-53页 |
| 2.2.14 植物基因组DNA的提取 | 第53-54页 |
| 2.2.14.1 CTAB法提取基因组DNA | 第53页 |
| 2.2.14.2 植物基因组DNA的纯化 | 第53-54页 |
| 2.2.14.3 小量法提取基因组DNA | 第54页 |
| 2.2.15 全长基因组序列的获得 | 第54-55页 |
| 2.2.16 基因枪瞬时转化 | 第55-57页 |
| 2.2.16.1 目的基因融合GFP表达载体制备 | 第55页 |
| 2.2.16.2 洋葱表皮细胞的制备 | 第55-56页 |
| 2.2.16.3 基因枪微弹的准备 | 第56页 |
| 2.2.16.4 基因枪转化 | 第56-57页 |
| 2.2.17 植物表达载体的构建与转化 | 第57-59页 |
| 2.2.17.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第57页 |
| 2.2.17.2 植物表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 2.2.17.3 农杆菌感受态细胞的转化 | 第58页 |
| 2.2.17.4 农杆菌介导转化烟草 | 第58-59页 |
| 2.2.18 转基因烟草鉴定 | 第59-60页 |
| 2.2.19 转基因烟草的抗旱分析 | 第60页 |
| 2.2.20 转基因烟草的抗盐分析 | 第60-61页 |
| 2.2.21 组织化学染色分析 | 第61页 |
| 2.2.22 生理活性物质检测 | 第61页 |
| 2.2.23 转基因烟草的抗病性分析 | 第61-62页 |
| 2.2.23.1 病原菌培养基的配制 | 第61页 |
| 2.2.23.2 病原菌的活化 | 第61-62页 |
| 2.2.23.3 病原菌离体接种 | 第62页 |
| 2.2.23.4 转基因植株抗病性数据统计 | 第62页 |
| 2.2.24 荧光定量PCR分析 | 第62-63页 |
| 2.2.25 数据库及网络资源 | 第63页 |
| 2.2.26 生物学软件 | 第63-64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-89页 |
| 3.1 棉花GhWRKY25全长cDNA的分离 | 第64-66页 |
| 3.1.1 棉花RNA的提取及反转录 | 第64页 |
| 3.1.2 GhWRKY25中间片段的分离 | 第64-65页 |
| 3.1.3 GhWRKY255'片段的分离 | 第65页 |
| 3.1.4 GhWRKY253'片段的分离 | 第65页 |
| 3.1.5 GhWRKY25全长cDNA的分离 | 第65-66页 |
| 3.2 GhWRKY25的序列分析 | 第66-70页 |
| 3.2.1 GhWRKY25的全长cDNA序列分析 | 第66-67页 |
| 3.2.2 GhWRKY25蛋白序列分析 | 第67-70页 |
| 3.3 GhWRKY25基因组DNA的分离及序列分析 | 第70-71页 |
| 3.4 GhWRKY25部分启动子序列的分离及序列分析 | 第71-72页 |
| 3.5 GhWRKY25的亚细胞定位分析 | 第72-73页 |
| 3.6 GhWRKY25基因的表达特性分析 | 第73-75页 |
| 3.7 GhWRKY25超表达植株的获得与鉴定 | 第75-78页 |
| 3.7.1 植物表达载体的构建 | 第76-77页 |
| 3.7.2 T0代本生烟再生植株的获得 | 第77页 |
| 3.7.3 GhWRKY25转基因本生烟植株的鉴定 | 第77-78页 |
| 3.8 GhWRKY25超表达植株的对干旱的抗性分析 | 第78-82页 |
| 3.9 GhWRKY25超表达植株的抗氧化分析 | 第82-85页 |
| 3.10 GhWRKY25超表达植株对高盐的抗性分析 | 第85-87页 |
| 3.11 GhWRKY25超表达植株对病原菌的抗性分析 | 第87-89页 |
| 4 讨论 | 第89-96页 |
| 5 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 攻读学位期间发表主要论文情况 | 第114页 |
