| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 缩略词表 | 第6-10页 |
| 1 前言 | 第10-15页 |
| 1.1 选题依据 | 第10-11页 |
| 1.2 细胞凋亡机制 | 第11-13页 |
| 1.3 Ndufa4基因的概述 | 第13-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-35页 |
| 2.1 材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第15页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第15-16页 |
| 2.1.3 主要耗材 | 第16页 |
| 2.1.4 主要试剂及溶液配制 | 第16-18页 |
| 2.2 方法 | 第18-35页 |
| 2.2.1 试验前准备 | 第18页 |
| 2.2.2 小鼠受精卵的收集 | 第18-19页 |
| 2.2.3 小鼠受精卵的平面培养 | 第19页 |
| 2.2.4 小鼠受精卵模拟微重力环境下培养 | 第19页 |
| 2.2.5 小鼠GV期以及GVBD卵母细胞的收集 | 第19-20页 |
| 2.2.6 小鼠M2期卵母细胞的收集 | 第20页 |
| 2.2.7 小鼠早期胚胎的收集 | 第20页 |
| 2.2.8 小鼠细胞抽RNA | 第20-21页 |
| 2.2.9 PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.10 小鼠细胞RNA的反转录 | 第22-23页 |
| 2.2.11 引物的设计与合成 | 第23-24页 |
| 2.2.12 Q-PCR操作步骤 | 第24-26页 |
| 2.2.13 注射针、持卵针以及移胚针的制作 | 第26页 |
| 2.2.14 显微注射 | 第26页 |
| 2.2.15 表达载体pEGFP-Ndufa4的构建 | 第26-34页 |
| 2.2.16 Ndufa4基因SiRNA的序列 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-46页 |
| 3.1 小鼠受精卵平面培养与模拟微重力培养 | 第35-36页 |
| 3.2 单细胞测序结果的验证 | 第36-39页 |
| 3.2.1 单细胞测序差异基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| 3.2.2 单细胞测序差异基因的验证 | 第37-38页 |
| 3.2.3 Ndufa4基因的不同时期的表达情况 | 第38-39页 |
| 3.3 重组表达质粒的构建 | 第39-43页 |
| 3.3.1 Ndufa4基因的PCR扩增 | 第39页 |
| 3.3.2 质粒提取 | 第39-40页 |
| 3.3.3 重组质粒的菌液PCR | 第40页 |
| 3.3.4 重组质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.5 测序结果分析 | 第41页 |
| 3.3.6 脂质体转染293细胞 | 第41-42页 |
| 3.3.7 脂质体转染GC-1 细胞Ndufa4基因的表达情况 | 第42-43页 |
| 3.4 显微注射小鼠受精卵 | 第43-45页 |
| 3.5 过表达以及干扰的受精卵中凋亡基因的表达情况 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-50页 |
| 4.1 小鼠受精卵体外培养 | 第46页 |
| 4.2 小鼠受精卵模拟微重力培养 | 第46-47页 |
| 4.3 单细胞测序差异基因的验证 | 第47-48页 |
| 4.4 细胞的线粒体凋亡 | 第48-49页 |
| 4.5 小结 | 第49-50页 |
| 5 全文结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
