致谢 | 第5-7页 |
中文摘要 | 第7-8页 |
Abstract | 第8页 |
1 引言 | 第14-25页 |
1.1 异染色质 | 第14-20页 |
1.1.1 异染色质的特征 | 第14-16页 |
1.1.1.1 常染色质和异染色质有不同的修饰 | 第14页 |
1.1.1.2 异染色质以随机的形式在染色质序列上蔓延 | 第14-15页 |
1.1.1.3 生物体间异染色质相关的蛋白质具有同源性 | 第15-16页 |
1.1.2 异染色质的生成、蔓延和阻断 | 第16-20页 |
1.1.2.1 裂殖酵母中异染色质的生成、蔓延 | 第16-17页 |
1.1.2.2 裂殖酵母中异染色质蔓延的阻断 | 第17-18页 |
1.1.2.3 芽殖酵母中,异染色质的生成和蔓延 | 第18-20页 |
1.2 位置效应花斑(PEV)和表观遗传 | 第20-22页 |
1.2.1 位置效应花斑(PEV) | 第20-21页 |
1.2.2 表观遗传 | 第21-22页 |
1.3 交配类型区域的PEV现象 | 第22-24页 |
1.4 本研究的目标 | 第24-25页 |
2 实验材料和方法 | 第25-48页 |
2.1 实验材料 | 第25-34页 |
2.1.1 培养基配方 | 第25-29页 |
2.1.2 缓冲液配方 | 第29-31页 |
2.1.3 药物和试剂 | 第31-32页 |
2.1.4 仪器和设备 | 第32-34页 |
2.2 实验方法 | 第34-48页 |
2.2.1 质粒的构建 | 第34-35页 |
2.2.1.1 PCR | 第34-35页 |
2.2.1.2 酶切 | 第35页 |
2.2.1.3 连接 | 第35页 |
2.2.1.4 E.coli DH5α转化 | 第35页 |
2.2.2 酵母菌株的构建 | 第35-40页 |
2.2.2.1 常规克隆法(酶切、连接、转化)—酵母转化 | 第35-36页 |
2.2.2.2 随机孢子消化 | 第36页 |
2.2.2.3 分体分离 | 第36-40页 |
2.2.3 感受态的制备 | 第40页 |
2.2.4 酵母小量转化 | 第40-41页 |
2.2.5 Domain mapping | 第41-42页 |
2.2.6 DNA特异位点的突变 | 第42页 |
2.2.7 花斑形态分析 | 第42-43页 |
2.2.8 酵母基因组DNA的提取——机械破碎法 | 第43页 |
2.2.9 裂殖酵母总蛋白的提取和浓度测定 | 第43-44页 |
2.2.9.1 裂殖酵母总蛋白的提取 | 第43-44页 |
2.2.9.2 总蛋白的浓度测定 | 第44页 |
2.2.10 DNA pull down亲和纯化和质谱检测 | 第44-45页 |
2.2.10.1 DNA pull down亲和纯化 | 第44-45页 |
2.2.10.2 质谱检测 | 第45页 |
2.2.11 酵母单杂交 | 第45-48页 |
2.2.11.1 菌株的构建及AbAi检测 | 第45-46页 |
2.2.11.2 cDNA转化 | 第46-47页 |
2.2.11.3 酵母单杂交的筛选和阳性率的鉴定 | 第47-48页 |
3 实验结果分析 | 第48-63页 |
3.1 REⅡ作为边界元件可以吸引异染色质的蔓延 | 第48-51页 |
3.2 REⅡ的三段DNA片段参与吸引异染色质蔓延的作用 | 第51-55页 |
3.3 9bp的R框是REⅡ吸引异染色质蔓延的关键碱基序列 | 第55-58页 |
3.4 REⅡ可以在体外结合RNA Pol Ⅲ的亚基蛋白质 | 第58-61页 |
3.5 REⅡ在体内特异结合Cnp3、Rps5、Rps602等蛋白质 | 第61-63页 |
4 讨论 | 第63-66页 |
参考文献 | 第66-71页 |
作者简介及研究经历 | 第71页 |