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裂殖酵母中参与交配类型区域的异染色质蔓延的机制的研究

致谢第5-7页
中文摘要第7-8页
Abstract第8页
1 引言第14-25页
    1.1 异染色质第14-20页
        1.1.1 异染色质的特征第14-16页
            1.1.1.1 常染色质和异染色质有不同的修饰第14页
            1.1.1.2 异染色质以随机的形式在染色质序列上蔓延第14-15页
            1.1.1.3 生物体间异染色质相关的蛋白质具有同源性第15-16页
        1.1.2 异染色质的生成、蔓延和阻断第16-20页
            1.1.2.1 裂殖酵母中异染色质的生成、蔓延第16-17页
            1.1.2.2 裂殖酵母中异染色质蔓延的阻断第17-18页
            1.1.2.3 芽殖酵母中,异染色质的生成和蔓延第18-20页
    1.2 位置效应花斑(PEV)和表观遗传第20-22页
        1.2.1 位置效应花斑(PEV)第20-21页
        1.2.2 表观遗传第21-22页
    1.3 交配类型区域的PEV现象第22-24页
    1.4 本研究的目标第24-25页
2 实验材料和方法第25-48页
    2.1 实验材料第25-34页
        2.1.1 培养基配方第25-29页
        2.1.2 缓冲液配方第29-31页
        2.1.3 药物和试剂第31-32页
        2.1.4 仪器和设备第32-34页
    2.2 实验方法第34-48页
        2.2.1 质粒的构建第34-35页
            2.2.1.1 PCR第34-35页
            2.2.1.2 酶切第35页
            2.2.1.3 连接第35页
            2.2.1.4 E.coli DH5α转化第35页
        2.2.2 酵母菌株的构建第35-40页
            2.2.2.1 常规克隆法(酶切、连接、转化)—酵母转化第35-36页
            2.2.2.2 随机孢子消化第36页
            2.2.2.3 分体分离第36-40页
        2.2.3 感受态的制备第40页
        2.2.4 酵母小量转化第40-41页
        2.2.5 Domain mapping第41-42页
        2.2.6 DNA特异位点的突变第42页
        2.2.7 花斑形态分析第42-43页
        2.2.8 酵母基因组DNA的提取——机械破碎法第43页
        2.2.9 裂殖酵母总蛋白的提取和浓度测定第43-44页
            2.2.9.1 裂殖酵母总蛋白的提取第43-44页
            2.2.9.2 总蛋白的浓度测定第44页
        2.2.10 DNA pull down亲和纯化和质谱检测第44-45页
            2.2.10.1 DNA pull down亲和纯化第44-45页
            2.2.10.2 质谱检测第45页
        2.2.11 酵母单杂交第45-48页
            2.2.11.1 菌株的构建及AbAi检测第45-46页
            2.2.11.2 cDNA转化第46-47页
            2.2.11.3 酵母单杂交的筛选和阳性率的鉴定第47-48页
3 实验结果分析第48-63页
    3.1 REⅡ作为边界元件可以吸引异染色质的蔓延第48-51页
    3.2 REⅡ的三段DNA片段参与吸引异染色质蔓延的作用第51-55页
    3.3 9bp的R框是REⅡ吸引异染色质蔓延的关键碱基序列第55-58页
    3.4 REⅡ可以在体外结合RNA Pol Ⅲ的亚基蛋白质第58-61页
    3.5 REⅡ在体内特异结合Cnp3、Rps5、Rps602等蛋白质第61-63页
4 讨论第63-66页
参考文献第66-71页
作者简介及研究经历第71页

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