| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 一、前言 | 第8-11页 |
| 1 国内外研究现状及发展动态分析 | 第8-11页 |
| 1.1 高通量技术在病毒对猪致病机理研究中的广泛应用 | 第8-10页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9高通量敲除及筛选系统的成功应用 | 第10-11页 |
| 2 本研究的总体思路 | 第11页 |
| 二、材料与方法 | 第11-14页 |
| 1 材料 | 第11-12页 |
| 2 方法 | 第12-14页 |
| 2.1 研究方案 | 第12-13页 |
| 2.2 技术路线 | 第13-14页 |
| 三、结果 | 第14-20页 |
| 1 靶向NFκB p65基因的CRISPR/Cas9n系统构建及效率验证 | 第14-15页 |
| 1.1 sgRNA表达质粒对的构建 | 第14页 |
| 1.2 sgRNA表达质粒对效率验证 | 第14-15页 |
| 2 Cas9稳定表达载体的构建及鉴定 | 第15-16页 |
| 3 Cas9基因表达检测引物设计 | 第16-17页 |
| 4 猪小肠上皮细胞IPEC-J2转染及单克隆筛选 | 第17页 |
| 5 靶向猪NFκB p65基因的sgRNA表达载体pLL-p65构建 | 第17-18页 |
| 6 pLL-p65载体转染IPEC-J2细胞 | 第18-19页 |
| 7 Cas9稳定表达的猪肺泡巨噬细胞3D4/21单克隆筛选 | 第19-20页 |
| 四、讨论 | 第20-22页 |
| 1 sgRNA文库的构建是本研究的关键技术 | 第20页 |
| 2 猪肺泡巨噬细胞单克隆筛选是另一关键技术 | 第20-21页 |
| 3 使用CRISPR/Cas9高通量敲除系统筛选猪抗病功能基因,是本研究的创新之处 | 第21-22页 |
| 五、参考文献 | 第22-25页 |
| 六、致谢 | 第25-26页 |
| 七、博士后期间发表的学术论文清单 | 第26页 |
