| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-19页 |
| 1.1 L-丝氨酸及其应用 | 第9-11页 |
| 1.1.1 L-丝氨酸理化性质 | 第9页 |
| 1.1.2 L-丝氨酸的生物学性质 | 第9-10页 |
| 1.1.3 L-丝氨酸的应用 | 第10-11页 |
| 1.2 L-丝氨酸的生产概况 | 第11-12页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第11页 |
| 1.2.2 生物酶法 | 第11页 |
| 1.2.3 蛋白水解法 | 第11页 |
| 1.2.4 微生物发酵法 | 第11-12页 |
| 1.3 L-丝氨酸的合成、代谢及调控机制 | 第12-13页 |
| 1.3.1 L-丝氨酸的合成途径 | 第12页 |
| 1.3.2 L-丝氨酸的降解代谢途径 | 第12-13页 |
| 1.4 微生物利用糖质原料发酵生产L-丝氨酸的研究现状 | 第13-15页 |
| 1.4.1 E. coli发酵生产L-丝氨酸的研究现状 | 第13页 |
| 1.4.2 C. glutamicum发酵生产L-丝氨酸的研究现状 | 第13-15页 |
| 1.4.3 其他菌株 | 第15页 |
| 1.5 C. glutamicum糖转运与代谢 | 第15-17页 |
| 1.5.1 麦芽糖转运与代谢 | 第15-16页 |
| 1.5.2 葡萄糖转运与代谢 | 第16页 |
| 1.5.3 果糖转运与代谢 | 第16页 |
| 1.5.4 蔗糖转运与代谢 | 第16-17页 |
| 1.6 本课题的立题依据及意义 | 第17页 |
| 1.7 本课题的研究内容 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 引物 | 第19-20页 |
| 2.1.3 培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.5 实验试剂 | 第22页 |
| 2.1.6 试剂盒和分子工具酶 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-33页 |
| 2.2.1 E. coli菌株保藏、活化及培养 | 第23页 |
| 2.2.2 C. glutamicum菌株保藏、活化及培养 | 第23页 |
| 2.2.3 基因组提取 | 第23-24页 |
| 2.2.4 质粒抽提 | 第24页 |
| 2.2.5 目的基因的体外扩增及纯化回收 | 第24页 |
| 2.2.6 感受态制备 | 第24-25页 |
| 2.2.7 重组质粒的构建 | 第25-29页 |
| 2.2.8 磷酸果糖激酶酶活测定 | 第29页 |
| 2.2.9 果糖激酶酶活测定 | 第29页 |
| 2.2.10 葡萄糖6磷酸和果糖6磷酸含量测定 | 第29-30页 |
| 2.2.11 重组质粒稳定性分析 | 第30页 |
| 2.2.12 实时定量PCR | 第30页 |
| 2.2.13 糖蜜预处理方法 | 第30-31页 |
| 2.2.14 5L发酵罐培养 | 第31页 |
| 2.2.15 分析方法 | 第31-33页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第33-51页 |
| 3.1 碳源对C. glutamicum发酵的影响 | 第33-34页 |
| 3.1.1 碳源对出发菌 33a ΔSSA生长和产L-丝氨酸的影响 | 第33-34页 |
| 3.1.2 结果分析和讨论 | 第34页 |
| 3.2 异源表达scrK对C. glutamicum生长和产L-丝氨酸的影响 | 第34-40页 |
| 3.2.1 重组质粒pDXW10scrK的构建 | 第34-36页 |
| 3.2.2 重组菌 33a ?SSA/pDXW10scrK的构建 | 第36页 |
| 3.2.3 果糖激酶酶活测定 | 第36页 |
| 3.2.4 重组菌 33a ?SSA/pDXW10scrK发酵过程研究 | 第36-38页 |
| 3.2.5 中间代谢物测定 | 第38-39页 |
| 3.2.6 结果分析和讨论 | 第39-40页 |
| 3.3 pfkA对C. glutamicum发酵的影响 | 第40-45页 |
| 3.3.1 重组质粒pDXW10pfkA、pDXW10pfkA-scrK的构建 | 第40-42页 |
| 3.3.2 重组菌 33a ?SSA/pDXW10pfkA-scrK的构建 | 第42页 |
| 3.3.3 酶活力测定 | 第42页 |
| 3.3.4 重组质粒pDXW10pfkA-scrK传代稳定性分析 | 第42-43页 |
| 3.3.5 重组菌 33a ?SSA/pDXW10pfkA-scrK发酵过程研究 | 第43-44页 |
| 3.3.6 结果分析和讨论 | 第44-45页 |
| 3.4 重组菌株 33a ?SSA/pDXW10pfkA-scrK发酵条件优化 | 第45-51页 |
| 3.4.1 糖蜜对重组菌株发酵的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.2 糖蜜添加量优化 | 第46-47页 |
| 3.4.3 糖蜜对重组菌株EMP途径相关基因的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.4 重组菌 5L发酵罐分批发酵 | 第48页 |
| 3.4.5 重组菌 5L发酵罐分批补料发酵 | 第48-49页 |
| 3.4.6 结果分析与讨论 | 第49-51页 |
| 主要结论与展望 | 第51-53页 |
| 主要结论 | 第51页 |
| 展望 | 第51-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第59页 |
