摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
1 绪论 | 第9-18页 |
1.1 小麦传统转化 | 第9-12页 |
1.1.1 小麦转化受体 | 第9-10页 |
1.1.2 小麦遗传转化方法 | 第10-12页 |
1.2 基因编辑 | 第12-13页 |
1.3 植物位点特异性重组研究进展 | 第13-18页 |
1.3.1 位点特异性重组系统的机制及组成 | 第13-15页 |
1.3.2 应用与展望 | 第15-18页 |
2 研究目的 | 第18-19页 |
3 农杆菌介导的小麦转化体系的建立 | 第19-41页 |
3.1 植物材料 | 第20-21页 |
3.2 质粒 | 第21-22页 |
3.3 培养基成分及配制 | 第22-26页 |
3.4 方法 | 第26-35页 |
3.4.1 幼胚的消毒 | 第26页 |
3.4.2 农杆菌活化与侵染液制备 | 第26页 |
3.4.3 幼胚的分离与侵染 | 第26-27页 |
3.4.4 农杆菌侵染后幼胚共培养、恢复、筛选及植株的获得 | 第27-30页 |
3.4.5 报告基因DsRed的表达观察 | 第30-32页 |
3.4.6 转化植株的PCR检测 | 第32-35页 |
3.5 注意事项 | 第35-41页 |
4 小麦中位点特异性重组系统起始目标系建立初探 | 第41-51页 |
4.1 实验材料 | 第41-42页 |
4.1.1 植物材料 | 第41页 |
4.1.2 菌株 | 第41页 |
4.1.3 质粒载体 | 第41-42页 |
4.2 实验方法 | 第42-44页 |
4.2.1 电击法质粒转化农杆菌(详见附录) | 第42页 |
4.2.2 农杆菌介导小麦转化和再生体系(同前一章) | 第42-43页 |
4.2.3 SDS法小量提取小麦基因组DNA(同前章) | 第43页 |
4.2.4 PCR体系及程序 | 第43-44页 |
4.2.5 PCR结果检测 | 第44页 |
4.3 结果与分析 | 第44-49页 |
4.3.1 目标株系筛选策略 | 第44-46页 |
4.3.2 再生植株DsRed表达的检测 | 第46-47页 |
4.3.3 候选目标系植株中质粒整合情况的PCR检测 | 第47-49页 |
4.4 讨论与展望 | 第49-51页 |
4.4.1 起始目标系鉴定 | 第49页 |
4.4.2 起始目标系的应用 | 第49-50页 |
4.4.3 转基因技术的发展和挑战 | 第50-51页 |
结论 | 第51-53页 |
致谢 | 第53-55页 |
参考文献 | 第55-59页 |
附录 质粒电击法转化农杆菌 | 第59-60页 |