| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 番茄褪绿病毒简介 | 第13-22页 |
| 1.1.1 番茄褪绿病毒的分类及病原特征 | 第13-14页 |
| 1.1.2 番茄褪绿病毒发生和分布 | 第14-15页 |
| 1.1.3 番茄褪绿病毒的寄主范围和危害 | 第15-16页 |
| 1.1.4 番褪绿病毒的生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.1.5 番茄褪绿病毒的传播介体及方式 | 第17-18页 |
| 1.1.6 番茄褪绿病毒的检测技术 | 第18-21页 |
| 1.1.7 番茄褪绿病毒病的防治措施 | 第21-22页 |
| 1.2 番茄黄化曲叶病毒简介 | 第22-25页 |
| 1.2.1 番茄黄化曲叶病毒的分类及特征 | 第22页 |
| 1.2.2 番茄黄化曲叶病毒病发生情况及田间寄主范围 | 第22-23页 |
| 1.2.3 番茄黄化曲叶病毒病的传播方式 | 第23-24页 |
| 1.2.4 番茄黄花曲叶病毒病的症状 | 第24页 |
| 1.2.5 番茄黄化曲叶病毒的检测技术 | 第24-25页 |
| 1.3 荧光定量PCR简介 | 第25-28页 |
| 1.3.1 荧光定量PCR的原理 | 第25页 |
| 1.3.2 实时荧光定量PCR的几个重要参数 | 第25-26页 |
| 1.3.3 实时荧光PCR的分类 | 第26页 |
| 1.3.4 实时荧光定量PCR的方法 | 第26-27页 |
| 1.3.5 荧光定量PCR的特点 | 第27页 |
| 1.3.6 荧光定量PCR的应用 | 第27-28页 |
| 1.4 研究目的意义与内容 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-46页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第29-31页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第29-30页 |
| 2.1.2 试剂与耗材 | 第30页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.4 实验所需试剂及配制 | 第31页 |
| 2.2 番茄褪绿病毒的鉴定及检测 | 第31-38页 |
| 2.2.1 样品RNA提取 | 第31-32页 |
| 2.2.2 引物的设计与合成 | 第32-33页 |
| 2.2.3 反转录cDNA的合成 | 第33页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.2.5 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第34页 |
| 2.2.6 PCR产物回收 | 第34-35页 |
| 2.2.7 基因片段连接载体 | 第35页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.9 连接产物转化大肠杆菌 | 第36页 |
| 2.2.10 阳性克隆的PCR验证 | 第36-37页 |
| 2.2.11 碱裂解法提取质粒DNA | 第37-38页 |
| 2.2.12 重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| 2.2.13 序列分析 | 第38页 |
| 2.3 番茄黄化曲叶病毒与番茄褪绿病毒复合侵染的鉴定 | 第38-40页 |
| 2.3.1 样品DNA提取 | 第38-39页 |
| 2.3.2 番茄黄化曲叶病毒的PCR检测与扩增 | 第39页 |
| 2.3.3 PCR产物的克隆及测序 | 第39-40页 |
| 2.4 番茄褪绿病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR体系的建立 | 第40-46页 |
| 2.4.1 引物设计与验证 | 第40页 |
| 2.4.2 模板RNA的提取及cDNA的制备 | 第40-41页 |
| 2.4.3 PCR扩增 | 第41页 |
| 2.4.4 PCR产物的克隆及测序 | 第41-42页 |
| 2.4.5 SYBR Green l荧光定量PCR反应体系条件的优化 | 第42-43页 |
| 2.4.6 标准曲线的绘制 | 第43-44页 |
| 2.4.7 溶解曲线的分析 | 第44页 |
| 2.4.8 特异性试验 | 第44页 |
| 2.4.9 灵敏度检测 | 第44页 |
| 2.4.10 重复性试验 | 第44页 |
| 2.4.11 SYBR Green I光定量PCR的检测样品 | 第44-45页 |
| 2.4.12 接种不同时间病毒含量变化 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-61页 |
| 3.1 番茄褪绿病毒的鉴定 | 第46-52页 |
| 3.1.1 天津、河北番茄褪绿病毒的鉴定及检测 | 第46-47页 |
| 3.1.2 天津、河北番茄褪绿病毒分离物外壳蛋白及热激蛋白扩增 | 第47-48页 |
| 3.1.3 序列一致性分析结果 | 第48-49页 |
| 3.1.4 系统进化树分析 | 第49-52页 |
| 3.2 番茄黄化曲叶病毒与番茄褪绿病毒复合侵染的鉴定 | 第52页 |
| 3.3 ToCV SYBR Green I荧光定量PCR方法的建立 | 第52-61页 |
| 3.3.1 RNA提取及PCR验证 | 第52-54页 |
| 3.3.2 重组质粒的鉴定 | 第54页 |
| 3.3.3 ToCV SYBR Green I荧光定量PCR反应体系条件的优化 | 第54-56页 |
| 3.3.4 标准曲线的绘制 | 第56-57页 |
| 3.3.5 溶解曲线的建立 | 第57页 |
| 3.3.6 特异性试验 | 第57-58页 |
| 3.3.7 灵敏度检测 | 第58页 |
| 3.3.8 重复性试验 | 第58-59页 |
| 3.3.9 样品的检测 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 4.1 番茄褪绿病毒的检测与鉴定 | 第61页 |
| 4.2 番茄褪绿病毒和番茄黄化曲叶病毒复合侵染 | 第61-62页 |
| 4.3 ToCV SYBR Green I荧光定量PCR方法的建立 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考 文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第73页 |
