| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-19页 |
| 1.1 最小基因组的提出 | 第8页 |
| 1.2 研究基因组最小化的技术路线 | 第8-9页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌基因组简化研究进展 | 第9-10页 |
| 1.4 无标记遗传操作策略 | 第10-16页 |
| 1.4.1 无标记遗传操作的负筛选标记基因 | 第11-12页 |
| 1.4.2 依赖枯草芽胞杆菌内源重组系统的策略 | 第12-14页 |
| 1.4.3 依赖位点特异性重组的策略 | 第14-15页 |
| 1.4.4 λRed重组系统介导的ssDNA重组 | 第15-16页 |
| 1.4.5 通过Sce I内切酶提高抗性消除的效率 | 第16页 |
| 1.5 核黄素的性质和应用 | 第16-17页 |
| 1.6 胸苷的性质和应用 | 第17-18页 |
| 1.7 本课题研究意义和主要研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第19-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第20页 |
| 2.1.3 实验药品 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要溶液配置 | 第21-22页 |
| 2.1.5 培养基 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 2.2.2 大肠杆菌化学感受态细胞的转化 | 第23-24页 |
| 2.2.3 大肠杆菌质粒DNA的提取方法 | 第24页 |
| 2.2.4 枯草芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.5 PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.6 DNA片段的纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.7 DNA片段的酶切和连接 | 第27-28页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.2.9 枯草芽孢杆菌的Spizizen转化 | 第28-29页 |
| 2.2.10 实验数据测定 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-64页 |
| 3.1 B. subtilis 168基因组无痕敲除策略 | 第30-31页 |
| 3.2 构建B. subtilis 168基因组简化菌株 | 第31-56页 |
| 3.2.1 pro5（ynxB-dut）基因区段的敲除 | 第32-33页 |
| 3.2.2 pro6（yoaV-yobO）基因区段的敲除 | 第33-38页 |
| 3.2.3 pdp-rocR基因区段的敲除 | 第38-42页 |
| 3.2.4 ycxB-sipU基因区段敲除 | 第42-46页 |
| 3.2.5 yisB-yit D基因区段敲除 | 第46-50页 |
| 3.2.6 yrkS-yraK基因区段敲除 | 第50-52页 |
| 3.2.7 yybP-yyaJ基因区段敲除 | 第52-56页 |
| 3.3 测试基因组简化菌株核黄素生产能力 | 第56-59页 |
| 3.3.1 只含ribC突变的基因组简化菌株生产核黄素发酵表征 | 第56-57页 |
| 3.3.2 基因组简化菌株中导入PMX45质粒生产核黄素发酵表征 | 第57-59页 |
| 3.4 测试基因组简化菌株发酵生产胸苷能力 | 第59-64页 |
| 3.4.1 敲除回补途径基因对生产胸苷的影响 | 第59-61页 |
| 3.4.2 强表达胸苷合成途径基因对生产胸苷的影响 | 第61-62页 |
| 3.4.3 强表达嘌呤代谢途径的关键基因对生产胸苷的影响 | 第62-64页 |
| 第四章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 4.1 实验主要结论 | 第64页 |
| 4.2 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
